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youcaoke銀蟲 (著名寫手)
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[交流]
請教一個(gè)southern blot問題 已有1人參與
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最近看了一篇文章,用southern來檢測某一基因在基因組中的拷貝數(shù),提取基因組后,用三個(gè)酶(Eco R1 , Hind III and Pst I)分別做了酶切,雜交結(jié)果為:Eco R1 和Hind III 酶切得到三條雜交帶,Pst I酶切得到5條雜交帶。 作者作了如下分析: “An examination of restriction sites within the genomic sequence indicated the presence of one Hind III site, three Pst I sites (two of the three fall into the same intron), but no Eco R1 site within the genomic sequence.” “Therefore, if the genome contains a single copy gene, a single band was expected from Eco R1 digestion; two bands were expected from Hind III digestion; and three bands were expected from Pst I digestion.” 如作者所說,基因組中只有一個(gè)Hind III site,為什么“two bands were expected from Hind III digestion”?基因組中不含Eco R1 site ,又怎么得到“a single band ”? 求各位大蝦指點(diǎn)!感激不盡! |

金蟲 (小有名氣)
金蟲 (小有名氣)
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首先,你要弄清楚一個(gè)概念,那就是他說的是基因中有幾個(gè)酶切位點(diǎn),而不是基因組。基因組中各個(gè)酶的位點(diǎn)都是十分多十分多的。 他的意思是他的目的基因中不含ECOR1,那么他的目的基因的序列是不會被切斷的,而切斷的是目的基因外的基因組,假設(shè)目的基因叫A,那么A的前面和后面一定會有ECOR1的酶切位點(diǎn),只是A的里面沒有,那么酶切后,A就是一個(gè)完整的片段,經(jīng)過與A相匹配的探針雜交,只能得到A這個(gè)片段的一條帶。 同理,A中間含有HIND3,那么A前面和后面的HIND3會將A切成一條片段,而A中間的HIND3又會將A切斷,把A切成了兩段,雜交時(shí),探針會與這兩段去雜交,結(jié)果得到兩條帶。 |
銀蟲 (著名寫手)

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