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zqt123_1981木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
已知全長(zhǎng)基因怎樣克隆并構(gòu)建表達(dá)載體
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目的基因在Genbank有mRNA全長(zhǎng)序列,我想把它克隆出來(lái)構(gòu)建表達(dá)載體,1 atggctgtag cggaggaact gagaaacgct ccacgtgcaa agggtccggc caccatccta。。。。。。 1141 actgttgtgc tgcatagcat tcctacaatt acaaattaa。請(qǐng)問(wèn)怎樣設(shè)計(jì)引物克隆全長(zhǎng)??pGM-T載體的話(huà)還用添加酶切位點(diǎn)與保護(hù)堿基嗎?有同仁說(shuō)直接從頭尾各選一定長(zhǎng)度的堿基就可以嗎?怎樣驗(yàn)證啊 |
木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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takara公司有專(zhuān)門(mén)針對(duì)高gc含量的GC buffer。對(duì)應(yīng)有LA-Taq酶,可以直接接入T載體的。 驗(yàn)證的話(huà),先酶切,條帶大小正確的話(huà),送去測(cè)序 |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
我們是糖 甜到憂(yōu)傷

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