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[交流]
請教：菌液pcr帶總是很弱，為什么？ 已有3人參與
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各位戰(zhàn)友們， 我p一個基因，回收連接轉(zhuǎn)化，挑菌搖菌，做菌液pcr鑒定，不知道為什么，每次菌液pcr的帶很弱很弱，不仔細看，都看不出來，我就選了一管菌液測序，測出的結(jié)果是正確的，是我想要的東西。這整個流程已經(jīng)重復(fù)四次了，每次都是這樣，不知為什么？菌液搖的也很濃，pcr循環(huán)數(shù)都在30以上，我p其他片段時，從來沒有這種現(xiàn)象。請問這是什么情況？ |
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1949stone: 手機回復(fù) 鼓勵 2011-07-11 10:14:16
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膠濃度有關(guān)。 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2011-07-11 07:48:16
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1949stone(EPI+1): 給力的天使 2011-07-11 10:13:51
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
1949stone(EPI+1): 給力的天使 2011-07-11 10:13:51
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弱沒有關(guān)系，只要有而且測序準確就沒有什么問題； 你PCR結(jié)果很弱可能原因有以下幾點（個人分析）： 1：菌的濃度太大了，導(dǎo)致酶的作用部分喪失，這完全有可能； 2：PCR體系不合適； 3：退火溫度的選擇不當(dāng)，這一點很有可能的，因為你循環(huán)次數(shù)都30次以上了，如果退火溫度選擇合適，我覺得應(yīng)該是比較亮的； 4：延伸時間的選擇，不知道你的片段多大？如果大片段，你延伸的時間段也會出現(xiàn)條帶弱的情況的。 所以自己慢慢一步一步找原因，然后解決問題，加油！  |
3樓2011-07-11 09:12:02
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