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凌-強(qiáng)銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
pcr產(chǎn)物 MspI（Takara）酶切條帶彌散 原因
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最近用MspI 酶切PCR產(chǎn)物，但是跑出來(lái)的條帶在100bp處總是出現(xiàn)彌散條帶，是向兩邊擴(kuò)張那種，感到很奇怪，找不到原因？ ps：前期也用MspI酶切PCR產(chǎn)物，但是都挺好的，現(xiàn)在就突然出現(xiàn)這樣的原因了，我什么都沒(méi)有改變。求高手指點(diǎn)下原因，謝謝 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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dhd997(金幣+5): good 2011-07-12 19:31:09
dhd997(金幣+5): good 2011-07-12 19:31:09
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我以前酶切之后跑膠出現(xiàn)過(guò)上下彌散很厲害的時(shí)候，向兩邊彌散還沒(méi)有碰到過(guò)。 請(qǐng)問(wèn)你酶切了多久？ 有時(shí)候切太久，就容易彌散。 你用MspI酶切的片段與以前的片段是一個(gè)嗎？ 有些基因片段用某些酶切后不知道什么原因也容易發(fā)生彌散。 也可能是你的酶被污染了。 我一般都是換一個(gè)牌子的酶，或者是改變一下酶切體系，分子生物實(shí)驗(yàn)好多地方都無(wú)從找原因。 |
2樓2011-07-12 12:54:27
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酶切體系一般按說(shuō)明書來(lái)，酶切時(shí)間很關(guān)鍵，不要切太長(zhǎng)時(shí)間。時(shí)間太長(zhǎng)的話就容易出現(xiàn)彌散的現(xiàn)象。建議切2-3小時(shí)就行了。 3樓2011-10-10 09:42:25
junxiao0320
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4樓2011-10-23 08:02:41
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6樓2011-11-06 21:10:55
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