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wujiangjie

木蟲 (正式寫手)

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[交流] 如何在丙烯酰胺凝膠中固定天然DNA

各位大蝦，我現(xiàn)在用聚丙烯酰胺的多孔材料和天然魚精DNA物理吸附后，DNA泄露比較嚴(yán)重，我考慮利用AM上的氨基共價(jià)修飾DNA，但是那些方法都建立在修飾合成DNA基礎(chǔ)上，比如修飾5'端，修飾DNA上的磷酸基團(tuán)，可是我的是天然DNA，它是混合的，這些方法都不好修飾，請(qǐng)問有沒有什么方法可以解決這個(gè)問題，讓DNA不在泄露呢？謝謝！�。�

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1樓 2011-07-12 19:41:01

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beastzq

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Originally posted by wujiangjie at 2011-07-14 14:44:54:
謝謝回復(fù)！這個(gè)不加電場(chǎng)還是漏，我測(cè)試過。請(qǐng)問這個(gè)陽離子單體文獻(xiàn)有報(bào)道嗎，你看過相關(guān)的文獻(xiàn)提到嗎，以及在哪買的這些信息嗎？謝謝！

google之

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9樓2011-07-14 15:59:29

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beastzq

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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
wujiangjie(金幣+1): 謝謝！ 2011-07-13 20:39:55

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Originally posted by wujiangjie at 2011-07-12 19:41:01:
各位大蝦，我現(xiàn)在用聚丙烯酰胺的多孔材料和天然魚精DNA物理吸附后，DNA泄露比較嚴(yán)重，我考慮利用AM上的氨基共價(jià)修飾DNA，但是那些方法都建立在修飾合成DNA基礎(chǔ)上，比如修飾5'端，修飾DNA上的磷酸基團(tuán)，可是我的是 ...

一定要吸附嗎？合成PAM的時(shí)候就把DNA包埋進(jìn)去好了
或者合成凝膠的時(shí)候加點(diǎn)陽離子單體共聚，可能可以增加吸附量
或者與反應(yīng)性強(qiáng)的單體（如烯丙基縮水甘油醚等）共聚，再共價(jià)固定DNA
AM上的氨基是酰胺，一般情況下很穩(wěn)定，反應(yīng)性不好的

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3樓2011-07-13 19:46:51

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Originally posted by beastzq at 2011-07-13 19:46:51:
一定要吸附嗎？合成PAM的時(shí)候就把DNA包埋進(jìn)去好了
或者合成凝膠的時(shí)候加點(diǎn)陽離子單體共聚，可能可以增加吸附量
或者與反應(yīng)性強(qiáng)的單體（如烯丙基縮水甘油醚等）共聚，再共價(jià)固定DNA
AM上的氨基是酰胺，一般情 ...

謝謝你的回復(fù)！我就是合成ＰＡＭ包埋的，但是不行，過段時(shí)間后泄露了。我的ＤＮＡ是天然混合的，不好修飾，所以共價(jià)不行。另外關(guān)于合成凝膠時(shí)加點(diǎn)陽離子單體共聚，請(qǐng)問你能具體給幾個(gè)例子嗎，常見的，便宜的？還有這個(gè)會(huì)影響凝膠成膠嗎？會(huì)不會(huì)不能成膠呢？謝謝�。�！

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4樓2011-07-13 20:43:03

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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
wujiangjie(金幣+1): 謝謝！ 2011-07-14 09:08:07

引用回帖:

Originally posted by wujiangjie at 2011-07-13 20:43:03:
謝謝你的回復(fù)！我就是合成ＰＡＭ包埋的，但是不行，過段時(shí)間后泄露了。我的ＤＮＡ是天然混合的，不好修飾，所以共價(jià)不行。另外關(guān)于合成凝膠時(shí)加點(diǎn)陽離子單體共聚，請(qǐng)問你能具體給幾個(gè)例子嗎，常見的，便宜的？ ...

你DNA的分子量是多大的？一般幾千到幾萬的聚合物都很容易固定的啊
如果包埋不了，交聯(lián)劑多加點(diǎn)也可以。
你的凝膠是多孔的？用什么方法做的多孔凝膠呢？
陽離子單體可以是二甲基二烯丙基氯化銨等季銨鹽單體，和AM共聚沒問題的，
如果是帶胍基的，應(yīng)該吸附效果會(huì)很好，但是單體要自己合成，我也沒試過，不過文獻(xiàn)很多的。

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5樓2011-07-13 21:36:41

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