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liuchenammk銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
DNA丙烯酰胺電泳
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| 各位師兄師姐!你們好,小弟剛剛研一,求助在DNA丙烯酰胺中比較好的銀染方法,小弟感激不盡!網(wǎng)上太亂了,求助師兄師姐們自己操作過程中比較的方法(最好有各種試劑用量)流程!! |
銀蟲 (初入文壇)
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銀染實(shí)驗(yàn) 銀染溶液的配置:實(shí)驗(yàn)之前準(zhǔn)備4℃水 1. 固定液(10%醋酸):20ml冰醋酸,180mlddH2O混勻(通風(fēng)廚中進(jìn)行) 2. 染色液:將0.1g AgNO3溶解于100 ml ddH2O中,使用前加0.15ml37%甲醛溶液,必須儲(chǔ)存于避光瓶中,防止接觸皮膚(通風(fēng)廚中進(jìn)行) 3.顯影液:將6gNa2CO3溶解于200ml ddH2O中,冷卻至4℃, 使用前加0.3ml37%甲醛溶液(通風(fēng)廚中進(jìn)行)30μl 0.1M五水硫代硫酸鈉;(0.1M Na2S2O3。5H2O:將1.24g Na2S2O3。5H2O溶于50mlddH2O)。放入冰箱中冷卻到4攝氏度。 注意事項(xiàng): 1、 染色液和顯影液要現(xiàn)用現(xiàn)配; 2、 顯影液必須在4℃使用且必須保存在4℃; 3、 甲醛蒸汽致癌,在通風(fēng)廚內(nèi)操作; 4、 實(shí)驗(yàn)室中柔和的背景光線有利于降低背景顏色; 5、 顯色不能在透光的盒子中進(jìn)行; 6、 溶液不能直接倒在膠面上,應(yīng)使盤傾斜后將溶液倒在盤的角上,或者將每種溶液各方一盤,然后將膠從一個(gè)盤轉(zhuǎn)到另一個(gè)盤; 7、 溶液的體積必須足夠?qū)⒛z全部浸沒; 8、 顯色過程中盤中須輕輕搖動(dòng)。 實(shí)驗(yàn)步驟: 1、 固定:用刀子輕輕分開玻璃板,將帶有凝膠的一塊玻璃板放入盛有200ml固定液的盤子中,放在水平搖床上搖動(dòng)20min或直至染料帶完全消失 2、 洗滌:把固定液倒回大燒杯中,然后用ddH2O清洗三次,每次2min 3、 染色:把玻璃板放在盛有100ml染色液的盤子里,在水平搖床上搖動(dòng)30min 4、 顯影:把玻璃板在預(yù)冷ddH2O中快速過一下(不超過10s),迅速放入預(yù)冷(4℃)的顯影液中,顯色3-5min或直至所有的帶都出現(xiàn) 5、 停止:當(dāng)出現(xiàn)清晰的條帶時(shí),加入先前用過的500ml固定液輕輕搖動(dòng),停止顯影 6、 用ddH2O將凝膠洗2次,每次2min 7、 晾干,掃描 8、 拍照觀察 |

木蟲 (職業(yè)作家)
哲學(xué)@草根

木蟲 (正式寫手)

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