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liuchenammk銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
DNA丙烯酰胺電泳
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| 各位師兄師姐！你們好，小弟剛剛研一，求助在DNA丙烯酰胺中比較好的銀染方法，小弟感激不盡！網(wǎng)上太亂了，求助師兄師姐們自己操作過(guò)程中比較的方法（最好有各種試劑用量）流程�。�！ |
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驕陽(yáng)微肆
銀蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
liuchenammk(金幣+1): 謝謝師兄！ 2011-09-21 22:16:34
dhd997(金幣+5, MolEPI+1): 鼓勵(lì) 2011-09-22 08:07:54
liuchenammk(金幣+1): 謝謝師兄！ 2011-09-21 22:16:34
dhd997(金幣+5, MolEPI+1): 鼓勵(lì) 2011-09-22 08:07:54
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銀染實(shí)驗(yàn) 銀染溶液的配置：實(shí)驗(yàn)之前準(zhǔn)備4℃水 1. 固定液（10%醋酸）：20ml冰醋酸，180mlddH2O混勻（通風(fēng)廚中進(jìn)行） 2. 染色液：將0.1g AgNO3溶解于100 ml ddH2O中，使用前加0.15ml37%甲醛溶液,必須儲(chǔ)存于避光瓶中，防止接觸皮膚（通風(fēng)廚中進(jìn)行） 3.顯影液：將6gNa2CO3溶解于200ml ddH2O中，冷卻至4℃， 使用前加0.3ml37%甲醛溶液（通風(fēng)廚中進(jìn)行）30μl 0.1M五水硫代硫酸鈉；（0.1M Na2S2O3。5H2O：將1.24g Na2S2O3。5H2O溶于50mlddH2O）。放入冰箱中冷卻到4攝氏度。 注意事項(xiàng)： 1、 染色液和顯影液要現(xiàn)用現(xiàn)配； 2、 顯影液必須在4℃使用且必須保存在4℃； 3、 甲醛蒸汽致癌，在通風(fēng)廚內(nèi)操作； 4、 實(shí)驗(yàn)室中柔和的背景光線有利于降低背景顏色； 5、 顯色不能在透光的盒子中進(jìn)行； 6、 溶液不能直接倒在膠面上，應(yīng)使盤傾斜后將溶液倒在盤的角上，或者將每種溶液各方一盤，然后將膠從一個(gè)盤轉(zhuǎn)到另一個(gè)盤； 7、 溶液的體積必須足夠?qū)⒛z全部浸沒(méi)； 8、 顯色過(guò)程中盤中須輕輕搖動(dòng)。 實(shí)驗(yàn)步驟： 1、 固定：用刀子輕輕分開玻璃板，將帶有凝膠的一塊玻璃板放入盛有200ml固定液的盤子中，放在水平搖床上搖動(dòng)20min或直至染料帶完全消失 2、 洗滌：把固定液倒回大燒杯中，然后用ddH2O清洗三次，每次2min 3、 染色：把玻璃板放在盛有100ml染色液的盤子里，在水平搖床上搖動(dòng)30min 4、 顯影：把玻璃板在預(yù)冷ddH2O中快速過(guò)一下（不超過(guò)10s），迅速放入預(yù)冷（4℃）的顯影液中，顯色3-5min或直至所有的帶都出現(xiàn) 5、 停止：當(dāng)出現(xiàn)清晰的條帶時(shí)，加入先前用過(guò)的500ml固定液輕輕搖動(dòng)，停止顯影 6、 用ddH2O將凝膠洗2次，每次2min 7、 晾干，掃描 8、 拍照觀察 |
2樓2011-09-21 21:07:13
wanhscn
木蟲 (職業(yè)作家)
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3樓2011-09-22 08:34:53
kid503
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4樓2011-09-22 08:49:32
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