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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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wujiangjie

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[交流] 如何在聚丙烯酰胺多孔材料中固定天然DNA

各位大蝦，我現(xiàn)在用聚丙烯酰胺的多孔材料和天然魚(yú)精DNA物理吸附后，DNA泄露比較嚴(yán)重，我考慮利用AM上的氨基共價(jià)修飾DNA，但是那些方法都建立在修飾合成DNA基礎(chǔ)上，比如修飾5'端，修飾DNA上的磷酸基團(tuán)，可是我的是天然DNA，它是混合的，這些方法都不好修飾，請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有什么方法可以解決這個(gè)問(wèn)題，讓DNA不在泄露呢？謝謝�。�！

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1樓 2011-07-12 19:39:04

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peijianjun

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生物DNA嗎這樣高級(jí)的東西算是高科技

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2樓2011-07-12 20:39:45

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wujiangjie(金幣+1): 謝謝 2011-07-12 22:16:05

在多空材料中間修飾一些帶有正電基團(tuán),氨基就不錯(cuò),可以利用靜電相互作用來(lái)吸附壓縮DNA
建議你去看一些關(guān)于DNA轉(zhuǎn)染方面的文獻(xiàn)

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3樓2011-07-12 21:00:19

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Originally posted by erics080 at 2011-07-12 21:00:19:
在多空材料中間修飾一些帶有正電基團(tuán),氨基就不錯(cuò),可以利用靜電相互作用來(lái)吸附壓縮DNA
建議你去看一些關(guān)于DNA轉(zhuǎn)染方面的文獻(xiàn)

謝謝你的回復(fù)！我的那個(gè)丙烯酰胺就是帶氨基的，在pH=7下，應(yīng)該是帶正電的，但是和DNA混合作用，也就是我一開(kāi)始提到的單純的吸附下，是泄露很多DNA的，能麻煩您給我具體說(shuō)說(shuō)DNA轉(zhuǎn)染對(duì)這個(gè)的幫助嗎？謝謝了！

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4樓2011-07-12 22:18:28

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wujiangjie(金幣+1): 謝謝！ 2011-07-13 08:24:19

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Originally posted by wujiangjie at 2011-07-12 22:18:28:
謝謝你的回復(fù)！我的那個(gè)丙烯酰胺就是帶氨基的，在pH=7下，應(yīng)該是帶正電的，但是和DNA混合作用，也就是我一開(kāi)始提到的單純的吸附下，是泄露很多DNA的，能麻煩您給我具體說(shuō)說(shuō)DNA轉(zhuǎn)染對(duì)這個(gè)的幫助嗎？謝謝了！

DNA傳染的材料必須是帶有正點(diǎn)基團(tuán)的, 這樣才能將DNA給壓縮到材料里面,防止在進(jìn)入細(xì)胞前被降解破壞.好像一般材料都會(huì)去做zeta電位,還有凝膠電泳測(cè)試,來(lái)表征DNA是否被壓縮包裹在材料里面
當(dāng)然你的材料要怎么做,最好還是自己下載了看一下Gene Delivery的文獻(xiàn)

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5樓2011-07-12 22:33:31

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Blacksides

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wujiangjie(金幣+1): 謝謝！ 2011-07-13 07:48:53

你可以用共價(jià)鍵把DNA接到你的高分子上，當(dāng)然這樣有點(diǎn)麻煩。

如果想直接非共價(jià)鍵的話，電荷作用可以考慮。但是你的聚丙烯酰胺帶電很弱，基本不太可能吸附DNA。而且如果在PBS里面進(jìn)行的話，高的離子強(qiáng)度會(huì)讓這一點(diǎn)微弱作用也被屏蔽掉。

DNA和正電荷的聚電解質(zhì)比如（poly （aminoethyl acrylate）之間的作用比較強(qiáng)，因?yàn)閮烧叻肿渔溕系碾姾擅芏雀撸瑓f(xié)同起來(lái)形成的complex穩(wěn)定性還是不錯(cuò)的，哪怕在PBS里面也會(huì)比較穩(wěn)定。你可以共聚帶正電的單體到聚丙烯酰胺上。

還要考慮DNA是單鏈還是雙鏈的。單鏈的DNA的鏈自由度高，更容易靜電作用，而雙鏈DNA可以看做一根棒，作用應(yīng)該弱些。試過(guò)才知道。

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6樓2011-07-13 04:43:24

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Originally posted by Blacksides at 2011-07-13 04:43:24:
你可以用共價(jià)鍵把DNA接到你的高分子上，當(dāng)然這樣有點(diǎn)麻煩。

如果想直接非共價(jià)鍵的話，電荷作用可以考慮。但是你的聚丙烯酰胺帶電很弱，基本不太可能吸附DNA。而且如果在PBS里面進(jìn)行的話，高的離子強(qiáng)度會(huì)讓這一 ...

謝謝你的回復(fù)！我那個(gè)DNA是雙鏈的，天然DNA，用共價(jià)挺難的，因?yàn)樗旧硎莻€(gè)混合物，鏈長(zhǎng)是不均一的，這樣修飾應(yīng)該要花大代價(jià)，且成功率也不高吧，這是我個(gè)人覺(jué)得，關(guān)于你說(shuō)的那個(gè)用鏈上帶高密度正電荷的單體和丙烯酰胺共聚的話，然后和DNA靜電作用，你覺(jué)得這個(gè)雙鏈DNA的效果好嗎？PS：我之前做過(guò)PDDA和魚(yú)精DNA的靜電作用，效果還行

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7樓2011-07-13 07:52:52

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你好！請(qǐng)問(wèn)你說(shuō)的是氨乙基甲基丙烯酸酯嗎？是下圖這個(gè)嗎？但是這個(gè)為什么就是高電荷密度的呢？和丙烯酰胺比較的話，我覺(jué)得電荷密度應(yīng)該差不多吧，每一個(gè)單體，C-C雙鍵展開(kāi)形成聚合物，就會(huì)有一個(gè)支鏈帶氨基，這樣的話，為什么聚氨乙基甲基丙烯酸酯是高電荷密度呢？謝謝�。�！

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8樓2011-07-13 09:03:00

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wujiangjie(金幣+1): 謝謝！ 2011-07-14 08:51:50

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Originally posted by wujiangjie at 2011-07-13 09:03:00:
你好！請(qǐng)問(wèn)你說(shuō)的是氨乙基甲基丙烯酸酯嗎？是下圖這個(gè)嗎？但是這個(gè)為什么就是高電荷密度的呢？和丙烯酰胺比較的話，我覺(jué)得電荷密度應(yīng)該差不多吧，每一個(gè)單體，C-C雙鍵展開(kāi)形成聚合物，就會(huì)有一個(gè)支鏈帶氨基，這 ...

對(duì)，就是圖中那個(gè)。一個(gè)是質(zhì)子化了的銨鹽，一個(gè)只是酰胺，前者正電荷強(qiáng)度要高很多。
如果你是聚合物的多孔想要trap 雙鏈DNA的話，比單鏈的要難一些，因?yàn)闆](méi)法更好的纏繞。具體怎樣試過(guò)才知道啊。

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9樓2011-07-13 22:38:11

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Originally posted by Blacksides at 2011-07-13 22:38:11:
對(duì)，就是圖中那個(gè)。一個(gè)是質(zhì)子化了的銨鹽，一個(gè)只是酰胺，前者正電荷強(qiáng)度要高很多。
如果你是聚合物的多孔想要trap 雙鏈DNA的話，比單鏈的要難一些，因?yàn)闆](méi)法更好的纏繞。具體怎樣試過(guò)才知道啊。

謝謝你的回復(fù)！請(qǐng)問(wèn)還有什么可以參與AM的共聚，以提高正電荷密度呢？因?yàn)槲也榱?這個(gè)物質(zhì)好貴，5g就是八百多，并且共聚后效果不一定就提高了，所以我想先買個(gè)便宜一點(diǎn)的試試。另外在帶電的孔道里trap雙鏈DNA，為什么比單鏈難呢？這個(gè)只需要正電荷孔道和負(fù)電的磷酸骨架吸附就行了吧，為什么雙鏈沒(méi)法更好的纏繞呢？這個(gè)我不是很理解，麻煩你幫我詳細(xì)解答一下，謝謝！��！

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10樓2011-07-14 08:57:19

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wujiangjie(金幣+1): 謝謝！ 2011-07-15 09:59:20

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Originally posted by wujiangjie at 2011-07-14 08:57:19:
謝謝你的回復(fù)！請(qǐng)問(wèn)還有什么可以參與AM的共聚，以提高正電荷密度呢？因?yàn)槲也榱?這個(gè)物質(zhì)好貴，5g就是八百多，并且共聚后效果不一定就提高了，所以我想先買個(gè)便宜一點(diǎn)的試試。另外在帶電的孔道里trap雙鏈DNA， ...

2-(Methacryloyloxy)ethyltrimethylammonium methyl sulfate
是一個(gè)便宜的單體。

雙鏈的DNA是比較stiff的，只有長(zhǎng)度到了一定程度才會(huì)有扭轉(zhuǎn)，短程內(nèi)是rod，DNA在你的聚合物內(nèi)很難結(jié)合的緊密，而單鏈的就能夠纏繞你的聚合物

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11樓2011-07-15 05:42:23

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