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[求助]
崩潰�。。�！關(guān)于轉(zhuǎn)化
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使用Ferments公司的NotI,NocI內(nèi)切酶 雙酶切pET22b及目的基因（37度，3小時(shí)），T4連接酶連接過夜，化學(xué)轉(zhuǎn)化E.coli Bl21或JM109或DH5a，涂布SOB培養(yǎng)基，就出現(xiàn)以下情況： 1 ：攜帶目的基因的菌不長，而陽性對(duì)照長的很好 2：這樣做幾次后，嘗試使用JM109，結(jié)果。。。陽性對(duì)照和目的克隆都不長，抓狂ing 3：好不容易長了幾個(gè)克隆，挑取后于含Amp的LB培養(yǎng)基中，就是不長，無語問蒼天 一氣之下，改用電轉(zhuǎn)，結(jié)果 克隆確實(shí)長出來，挑取的菌落也在含Amp的LB培養(yǎng)基中生長良好，菌液PCR也能觀察到目的條帶 但是，但是！��！送去測(cè)序，竟然又出現(xiàn)這樣的情況 1· 提不出質(zhì)粒 2 即使提出質(zhì)粒，T7啟動(dòng)子測(cè)序無信號(hào)��！ 3 剛剛好不容易有一個(gè)樣品有信號(hào)，將之通過BLastX與原來的序列 比對(duì)，竟然發(fā)現(xiàn)沒有相似性�。。�！ 蒼天啊，大地�。�！ 測(cè)序都做了快2個(gè)月了，就這么簡單的轉(zhuǎn)化，做了一個(gè)學(xué)期了�。。。。�！ 崩潰啊，跪求指點(diǎn)啊，哪位高人告訴我怎么回事��？ |
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anlewo7777
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5樓2017-10-26 20:11:47
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