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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 崩潰�。。�！關于轉化
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崩潰�。。�！關于轉化
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使用Ferments公司的NotI,NocI內切酶 雙酶切pET22b及目的基因（37度，3小時），T4連接酶連接過夜，化學轉化E.coli Bl21或JM109或DH5a，涂布SOB培養(yǎng)基，就出現(xiàn)以下情況： 1 ：攜帶目的基因的菌不長，而陽性對照長的很好 2：這樣做幾次后，嘗試使用JM109，結果。。。陽性對照和目的克隆都不長，抓狂ing 3：好不容易長了幾個克隆，挑取后于含Amp的LB培養(yǎng)基中，就是不長，無語問蒼天 一氣之下，改用電轉，結果 克隆確實長出來，挑取的菌落也在含Amp的LB培養(yǎng)基中生長良好，菌液PCR也能觀察到目的條帶 但是，但是！��！送去測序，竟然又出現(xiàn)這樣的情況 1· 提不出質粒 2 即使提出質粒，T7啟動子測序無信號��！ 3 剛剛好不容易有一個樣品有信號，將之通過BLastX與原來的序列 比對，竟然發(fā)現(xiàn)沒有相似性�。。。� 蒼天啊，大地�。�！ 測序都做了快2個月了，就這么簡單的轉化，做了一個學期了！�。。。�！ 崩潰啊，跪求指點啊，哪位高人告訴我怎么回事��？ |
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4樓2017-06-11 19:04:40
anlewo7777
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2樓2011-07-14 16:19:53
anlewo7777
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3樓2011-07-14 16:25:11
wang_xiaoxu
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5樓2017-10-26 20:11:47
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