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lixiaojing1318
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[交流]
熒光定量需要3個(gè)重復(fù)樣本嗎 已有8人參與
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熒光定量需要3個(gè)重復(fù)樣本嗎，還是只要一個(gè)樣品，做3個(gè)重復(fù)？ 提完RNA后，需要定量到相同濃度嗎？ |
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 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 | 【分子生物】EPI帖 |
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shaquila
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+5, EPI+1): 學(xué)習(xí)了！ 2011-07-19 16:25:52
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+5, EPI+1): 學(xué)習(xí)了！ 2011-07-19 16:25:52
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你說(shuō)的是biological replicate 和 technical replicate，一般每個(gè)樣本做三到四個(gè)技術(shù)重復(fù)，這個(gè)貌似是熒光定量必需的 生物學(xué)重復(fù)就是可以獨(dú)立重復(fù)提取兩三次，分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，熒光定量最好需要生物學(xué)重復(fù)～～ 另外RNA量最好定在一個(gè)范圍里面，雖然有內(nèi)參基因校正，但是大部分綜述推薦，這樣好調(diào)整模版量，并且由于是擴(kuò)增反應(yīng)，在2ΔΔct如果擴(kuò)增效率不平行，很可能誤差會(huì)放大，因此ΔΔct也最好都做個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品濃度最好在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。 摘自google～ A technical replicate involves the multiple labeling or reciprocal labeling of the same RNA sample. The purpose of a technical replicate is to control for technical variability within an experiment (array to array variation, reagent variation, dye incorporation, etc.) A well run experiment should have minimal variation thus minimizing the need for technical replicates. A biological replicate involves isolating RNA independently from replicate sources (multiple cell lines, multiple biopsies, multiple patients, etc). The purpose of a biological replicate is to control for biological diversity. Biological replicates are often more telling, and for this reason are “better” than technical replicates, however, biological replicates are often more difficult to obtain [ Last edited by shaquila on 2011-7-19 at 13:47 ] |
3樓2011-07-19 13:09:50
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6樓2011-07-21 11:45:06
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dhd997(金幣+2): 鼓勵(lì)一下 2011-07-30 13:14:04
dhd997(金幣+2): 鼓勵(lì)一下 2011-07-30 13:14:04
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您好，我是做基因在不同時(shí)期樣品的表達(dá)量，做的是相對(duì)定量。還有一些問(wèn)題，最近小木蟲(chóng)修復(fù)，一直沒(méi)有機(jī)會(huì)問(wèn)。 1.由于我是要做多個(gè)樣品，擴(kuò)增效率該怎么得到？還是每個(gè)樣都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？ 2.做完了實(shí)驗(yàn)，所得到的擴(kuò)增曲線和溶解曲線，是不是都得單獨(dú)保存?發(fā)文章時(shí)會(huì)都用到嗎，還是只需要幾個(gè)圖就可以了？ 下面是擴(kuò)增曲線和溶解曲線的圖，是不是CT值在30以上就不可以用？ 還有溶解曲線前面有峰，是不是有引物二聚體？ |
8樓2011-07-30 11:15:01
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9樓2011-07-31 10:25:24
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