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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 熒光定量需要3個重復樣本嗎
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lixiaojing1318
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[交流]
熒光定量需要3個重復樣本嗎 已有8人參與
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熒光定量需要3個重復樣本嗎，還是只要一個樣品，做3個重復？ 提完RNA后，需要定量到相同濃度嗎？ |
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 分子生化實驗經驗積累 | 【分子生物】EPI帖 |
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shaquila
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+5, EPI+1): 學習了！ 2011-07-19 16:25:52
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+5, EPI+1): 學習了！ 2011-07-19 16:25:52
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你說的是biological replicate 和 technical replicate，一般每個樣本做三到四個技術重復，這個貌似是熒光定量必需的 生物學重復就是可以獨立重復提取兩三次，分別進行實驗，熒光定量最好需要生物學重復～～ 另外RNA量最好定在一個范圍里面，雖然有內參基因校正，但是大部分綜述推薦，這樣好調整模版量，并且由于是擴增反應，在2ΔΔct如果擴增效率不平行，很可能誤差會放大，因此ΔΔct也最好都做個標準曲線，樣品濃度最好在標準曲線范圍內。 摘自google～ A technical replicate involves the multiple labeling or reciprocal labeling of the same RNA sample. The purpose of a technical replicate is to control for technical variability within an experiment (array to array variation, reagent variation, dye incorporation, etc.) A well run experiment should have minimal variation thus minimizing the need for technical replicates. A biological replicate involves isolating RNA independently from replicate sources (multiple cell lines, multiple biopsies, multiple patients, etc). The purpose of a biological replicate is to control for biological diversity. Biological replicates are often more telling, and for this reason are “better” than technical replicates, however, biological replicates are often more difficult to obtain [ Last edited by shaquila on 2011-7-19 at 13:47 ] |
3樓2011-07-19 13:09:50
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4樓2011-07-20 22:08:45
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5樓2011-07-20 22:11:13
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