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yangru.520木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
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大家好！我有一問(wèn)題很糾結(jié)，關(guān)于葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法，該曲線用于測(cè)定udpg(尿苷二磷酸葡萄糖)酶活性。UDPG的測(cè)定方法為：參照Douglus(1988)的方法:100μL 5mmol/L UDPG加50μL 50mmol/L MgCl2、緩沖液100μL、酶提取液20μL 加100μL 20mmol/L PPi開(kāi)始反應(yīng)，反應(yīng)15min后，沸水浴1min終止反應(yīng)。冷卻后加100μL 6mmol/L NADP(輔酶Ⅱ)、100μL（50μL） 1.5 IU/ml磷酸葡萄糖變位酶，50μL 5（1.5）IU/ml的6-磷酸葡萄糖脫氫酶，0.3（0.9）ml緩沖液，總體積1.5ml，30℃反應(yīng)5~10min后,340nm比色，用G-1-P(1-磷酸葡萄糖)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。做葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，設(shè)置不同葡萄糖濃度梯度后，不同濃度的葡萄糖溶液是在100μL 6mmol/L NADP(輔酶Ⅱ)、100μL（50μL） 1.5 IU/ml磷酸葡萄糖變位酶，50μL 5（1.5）IU/ml的6-磷酸葡萄糖脫氫酶，0.3（0.9）ml緩沖液，總體積1.5ml，30℃反應(yīng)5~10min后,340nm比色條件下做OD值呢？還是直接就在DNS配方條件下于540nm條件下測(cè)OD值？前一種是否有依據(jù)，我也不太清楚，望各位蝦友指點(diǎn)指點(diǎn)！不勝感激！ [ Last edited by yangru.520 on 2011-7-20 at 23:12 ] |
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2樓2011-07-20 23:35:12
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