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yangru.520

木蟲 (小有名氣)

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[求助] 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

大家好！我有一問題很糾結(jié)，關(guān)于葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法，該曲線用于測(cè)定udpg(尿苷二磷酸葡萄糖)酶活性。UDPG的測(cè)定方法為：參照Douglus(1988)的方法:100μL 5mmol/L UDPG加50μL 50mmol/L MgCl2、緩沖液100μL、酶提取液20μL 加100μL 20mmol/L PPi開始反應(yīng)，反應(yīng)15min后，沸水浴1min終止反應(yīng)。冷卻后加100μL 6mmol/L NADP(輔酶Ⅱ)、100μL（50μL） 1.5 IU/ml磷酸葡萄糖變位酶，50μL 5（1.5）IU/ml的6-磷酸葡萄糖脫氫酶，0.3（0.9）ml緩沖液，總體積1.5ml，30℃反應(yīng)5~10min后,340nm比色，用G-1-P(1-磷酸葡萄糖)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。做葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，設(shè)置不同葡萄糖濃度梯度后，不同濃度的葡萄糖溶液是在100μL 6mmol/L NADP(輔酶Ⅱ)、100μL（50μL） 1.5 IU/ml磷酸葡萄糖變位酶，50μL 5（1.5）IU/ml的6-磷酸葡萄糖脫氫酶，0.3（0.9）ml緩沖液，總體積1.5ml，30℃反應(yīng)5~10min后,340nm比色條件下做OD值呢？還是直接就在DNS配方條件下于540nm條件下測(cè)OD值？前一種是否有依據(jù)，我也不太清楚，望各位蝦友指點(diǎn)指點(diǎn)！不勝感激！

[ Last edited by yangru.520 on 2011-7-20 at 23:12 ]

回復(fù)此樓

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求助多糖的測(cè)定方法已經(jīng)有3人回復(fù)

1樓 2011-07-20 23:02:55

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斌斌1990

金蟲 (初入文壇)

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lstt09nk(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-07-21 09:51:43
yangru.520(金幣+1): 2011-07-22 16:22:47

應(yīng)該是后者，直接在DNS配方條件下，沸水浴后于540nm條件下測(cè)OD值，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線是葡萄糖濃度與Abs540的直接對(duì)應(yīng)關(guān)系，不能加入的其他的。

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回復(fù)此樓

科研路漫漫修遠(yuǎn)，吾將實(shí)驗(yàn)而求索

2樓2011-07-20 23:35:12