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rollandyoung金蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于質(zhì)粒pCAMBIA1301的驗(yàn)證
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別人送了我一個(gè)pCAMBIA1301的質(zhì)粒，不知道如何驗(yàn)證其可用性。 一、我做了如下工作： 1. 將帶有該質(zhì)粒的大腸桿菌菌液劃線于LB平板上，平板上含有50ug/ml的潮霉素（此質(zhì)粒具有抗潮霉素的基因） 2. 37℃培養(yǎng)16小時(shí)，結(jié)果每個(gè)平板上只有2-3個(gè)菌落出現(xiàn)。 二、問題： 1. 請(qǐng)問這是正常的嗎？ 2.菌落數(shù)量稀少是否與我加入的潮霉素含量過高有關(guān)？ 3. 為了鑒定此質(zhì)粒的可用性，我還需要做哪些工作？ 此質(zhì)粒是開展實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，且以前從未接觸過此類試驗(yàn)，顧求知欲望急切，請(qǐng)各位高手不吝賜教，先行謝過大家！ |
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3樓2011-07-26 11:16:57
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【答案】應(yīng)助回帖
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rollandyoung(金幣+2): 非常感謝你的幫助，很詳細(xì)！祝你試驗(yàn)順利！ 2011-07-26 12:18:55
dhd997(金幣+2): 鼓勵(lì)一下 2011-07-26 12:59:09
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dhd997(金幣+2): 鼓勵(lì)一下 2011-07-26 12:59:09
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1. 可以根據(jù)pCAMBIA1301的圖譜進(jìn)行酶切驗(yàn)證，如利用XhoI酶切則把潮霉素基因切下來獲得對(duì)應(yīng)的片段， 2. 利用35S啟動(dòng)子等設(shè)計(jì)引物測(cè)序，這個(gè)質(zhì)粒應(yīng)該是11837bp，序列也都公布了，直接比對(duì)就可以了。 |
2樓2011-07-26 11:14:43
天使托
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T.Shen
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