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goumiaoge新蟲 (初入文壇)
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[求助]
重組質(zhì)粒雙酶切問題
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| 各位大俠，客套話就不多說了，請包涵。我在做原核表達(dá)，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21后，做菌液PCR無目的條帶，提質(zhì)粒后做質(zhì)粒PCR有目的條帶，但是雙酶切卻切不出條帶來，何解？ |
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yesucao
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5樓2011-08-01 09:57:57
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good！確實(shí)如此，應(yīng)該先轉(zhuǎn)化到克隆菌株，驗(yàn)證質(zhì)粒正確后再轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌株。 2011-08-01 16:58:03
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good！確實(shí)如此，應(yīng)該先轉(zhuǎn)化到克隆菌株，驗(yàn)證質(zhì)粒正確后再轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌株。 2011-08-01 16:58:03
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1、每個(gè)酶都做一個(gè)單酶切，確定內(nèi)切酶沒有問題 2、BL21(DE3)是表達(dá)菌株，我覺得應(yīng)該先把重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)到克隆菌株如DH5a、Top10上，然后再提質(zhì)粒再做雙酶切，因?yàn)椴煌甑幕蛐筒灰粯�，對質(zhì)粒的修飾可能也不一樣，有一些酶對甲基化的位點(diǎn)是沒有作用的。 暫時(shí)就想到這么多。。。 |
4樓2011-08-01 09:57:44
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