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[求助]
關(guān)于用農(nóng)桿菌侵染法獲得轉(zhuǎn)基因植物的幾點問題
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蟲友們，先遇到些難題，希望有懂得的給指點指點。現(xiàn)在這謝謝大家了。 現(xiàn)在我正在做轉(zhuǎn)基因水稻，水稻品種為日本晴，實驗過程中遇到了幾點問題 1植株的分化率很低，具體沒統(tǒng)計，不過一個皿里30-40塊愈傷也就有3個出芽的。有的皿里一個也不出。 2分化的比較的慢，大約1個月才會有芽點出現(xiàn)，芽點出來后吧，長成小苗的時間也比較久。 3關(guān)于農(nóng)桿菌侵染時的最佳OD值，是0.5呢還是0.8.OD值應(yīng)該反映的菌的生長時期吧，那侵染時是不是采用的對數(shù)期的菌，那時OD值是多少呢？ 4關(guān)于繼代有文獻(xiàn)稱繼代4次最好，有的則說可以去掉繼代，各位又做轉(zhuǎn)基因水稻的都繼代幾次��？ |
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5樓2011-08-10 19:24:47
6樓2011-08-10 19:32:38
zqt123_1981
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2樓2011-08-08 13:59:02
liling77ll
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3樓2011-08-09 16:02:54
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4樓2011-08-10 13:28:12
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8樓2011-08-11 17:15:11
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jhu132llh(金幣+1): 鼓勵積極參與討論 2011-12-29 10:12:30
jhu132llh(金幣+1): 鼓勵積極參與討論 2011-12-29 10:12:30
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謝謝，謝謝。我們實驗室也是用的NB培養(yǎng)基，不過培養(yǎng)的時候比較的麻煩，先在NB2上培養(yǎng)，繼代在NB0.5上，侵染前又轉(zhuǎn)到了NB2上，2，和0.5指的是2,4-D的濃度是0.5,2mg/L,不過昨天我又看了篇文獻(xiàn)說誘導(dǎo)和繼代在光下培養(yǎng)有利于分化率的提高，不知道仁兄實驗室是光培養(yǎng)還是暗培養(yǎng)，我之前一直用的是暗培，不知道是否對分化率產(chǎn)生了影響。還有關(guān)于溫度，有的使用的是30度。這就屬于高溫了吧，先在看文獻(xiàn)看的都搞不懂那些可信，那些不可信了。還有篇文獻(xiàn)說農(nóng)桿菌侵染做轉(zhuǎn)基因水稻，40天就可得到轉(zhuǎn)基因植株，不知道真假？   |
9樓2011-08-12 08:42:29
897611428
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10樓2011-10-14 19:23:04
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