 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 40 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4595 | 回復: 39 | ||||
[交流]
做一個克隆所需的最短時間？比比誰更高效快速！
|
||||
|
克隆一個基因： 第一天：小體系PCR（上午）-大體系回收（下午）-小樣酶切-大體系酶切回收（包括載體）（晚上）-連接 第二天：早晨轉化-晚上搖菌 第三天：PCR鑒定和提質(zhì)粒酶切鑒定（上午提，下午鑒定） 一切順利的情況下，緊忙乎，有沒有更快更更高效的體系��？ 求交流！ |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實驗經(jīng)驗積累 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有220人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 4Kb以內(nèi)的單鏈克隆載體
已經(jīng)有4人回復
- 求助誰見過這樣的發(fā)酵搖瓶��？
已經(jīng)有7人回復
- 導師要求測TiO2導帶，現(xiàn)需要一篇文章，誰能幫下載下��？
已經(jīng)有5人回復
- 懂背散射的誰知道關于氧化鋁增強鋁背散射的顏色
已經(jīng)有5人回復
- 新基因的克隆和熒光定量表達比較好發(fā)的SCI雜志
已經(jīng)有12人回復
- 重金求助基因克隆與功能驗證方向 中文摘要350字左右翻譯成英語 急！ 急！ 急！在線等
已經(jīng)有3人回復
- 蟲子們有誰做過TA克隆呀？額想知道TA克隆的具體的實驗步驟
已經(jīng)有25人回復
- 【課件】自動快速編制現(xiàn)金流量表
已經(jīng)有15人回復
- 【求助/交流】目的基因克隆總不成功
已經(jīng)有5人回復
- 【求助/交流】有關分子克隆發(fā)生突變的疑惑
已經(jīng)有9人回復
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
中國科學院杭州醫(yī)學研究-常皓研究員課題組博士后招聘
+1/291
-
南京大學智能驅動與感知材料實驗室誠招博士/碩士/科研助理/訪問學生
+1/279
-
物理學 調(diào)劑
+1/85
-
有沒有在香港的蟲友啊
+1/79
-
坐標廣州，男征女，雙向奔赴
+1/67
-
中國藥科大學211-課題組招收2026博士/碩士
+1/58
-
上海交大化院功能大分子團隊招2026年碩士、聯(lián)培、博士后
+1/36
-
【2026博士招生/博后招聘】北京航空航天大學潘彪課題組——AI芯片設計方向
+1/11
-
211/雙一流---石河子大學---有機化學方向招調(diào)劑生
+1/11
-
南昌航空大學代威力教授招收光催化和光熱催化研究方向博士生
+1/9
-
英國埃克塞特大學 & 法國巴黎薩克雷大學聯(lián)合培養(yǎng)博士
+1/7
-
南京林業(yè)大學化學工程學院柏惺峰課題組招收2026年申請考核制博士2名
+1/7
-
招收化工與材料學科點研究生
+1/5
-
鎮(zhèn)江托爾化學有機合成研發(fā)崗位工作機會
+1/5
-
浙江大學高純分離團隊誠聘博士后
+1/5
-
武漢輕工大學土木水利青椒碩導招調(diào)劑
+1/4
-
紅外發(fā)射率測試（液體，2mm的小塊體）/紅外熱成像發(fā)射率設定
+1/4
-
福建師范大學海峽柔性電子學院招收2026調(diào)劑碩士
+1/3
-
北京石油化工學院 張慧杰老師團招2026年研究生復試調(diào)劑考生，歡迎聯(lián)系
+1/3
-
實驗室化合物氣體流量如何快速測量和控制
+1/2
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗: +248 - MolEPI: 46
- 應助: 257 (大學生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19455.4
- 帖子: 6586
- 在線: 2777.2小時
- 蟲號: 856414
2樓2011-08-09 22:49:02
3樓2011-08-09 22:53:26
4樓2011-08-10 10:45:23
6樓2011-08-10 11:37:07
西瓜7樓2011-08-10 11:49:04
8樓2011-08-10 13:30:24
10樓2011-08-10 14:14:31
11樓2011-08-10 16:39:42
12樓2011-08-10 16:42:48
13樓2011-08-10 18:05:47
★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+3): 鼓勵分享經(jīng)驗 2011-08-11 12:04:05
shuihaizi(金幣+3): 2011-08-11 13:18:23
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+3): 鼓勵分享經(jīng)驗 2011-08-11 12:04:05
shuihaizi(金幣+3): 2011-08-11 13:18:23
|
PCR 用pfu 或者PBO；連接酶用fermentas的T4連接酶，不過buffer我們公司自己配的，后來我試了一下他們公司帶的buffer，也挺好用的； 菌落PCR就是先挑單菌落在200ml的培養(yǎng)基中搖菌1h，然后取2.5ul做PCR（30ul反應體系） 反應體系 體積 H2O 23 μl 10 ×PCR緩沖液 3 μl 正向引物 (50pmol/μl) 0.5 μl 反向引物 (50pmol/μl) 0.5μl DNTP (10mmol/L each) 0.3 μl 菌液 2.5 μl Taq DNA聚合酶 (5U/μl) 0.2 μl 總體系 30 μl |
14樓2011-08-10 19:34:51
15樓2011-08-11 08:36:24
天使托
專家顧問 (職業(yè)作家)
-
專家經(jīng)驗: +57 - MolEPI: 106
- 應助: 95 (初中生)
- 貴賓: 0.263
- 金幣: 16332.8
- 帖子: 3652
- 在線: 289小時
- 蟲號: 441757
16樓2011-08-11 12:01:45
17樓2011-08-15 10:13:29
18樓2011-08-15 12:47:21
19樓2011-08-15 13:02:05
21樓2011-08-15 15:13:18
22樓2011-08-15 16:38:44
★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+4): good 2011-08-16 11:52:27
shuihaizi(金幣+2): 2011-08-23 16:18:42
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+4): good 2011-08-16 11:52:27
shuihaizi(金幣+2): 2011-08-23 16:18:42
|
另外IN FUSION，LIC等方法。連酶切連接一步都基本省掉了。更能節(jié)省時間。 看文獻大規(guī)模高通量做構建的時候，均采用上述構建方法。 如果對PCR很有信心，是不是連切膠都可以省掉，直接過一遍PCR純化柱。 另外現(xiàn)在的快速連接，5-10min搞定。、 最后質(zhì)粒也不需要那么復雜，菌落PCR鑒定，甚至快檢跑個電泳證明有插入基因。或者連鑒定都不鑒定（前提載體做得好）直接送測序，反正現(xiàn)在測序也便宜的很。 不過在學校的話，真是沒有必要這么趕，認認真真老老實實，一步一步進行，做好對照，一次成功才是王道 |
23樓2011-08-15 17:08:18
24樓2011-08-15 17:15:31
★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
shuihaizi(金幣+3): 2011-08-16 11:14:19
西瓜(金幣+4): 這都是經(jīng)驗啊 2011-08-16 11:52:12
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
shuihaizi(金幣+3): 2011-08-16 11:14:19
西瓜(金幣+4): 這都是經(jīng)驗啊 2011-08-16 11:52:12
|
PCR不一定要摸條件，其實連接至需要很少量的DNA分子就夠了，在你跑膠的時候只需要有隱約的條帶就夠了，甚至更少的兩都行。 轉化只需要冰浴15分鐘足夠了，過后的搖菌只是讓感受態(tài)菌恢復。時間長短沒事。柱子直接用DNA膠回收柱就可以了。 從你說的條件也是T載體的要求啊。 如果是亞克隆，可以把回收后的PCR產(chǎn)物直接進行酶切處理，然后再過柱回收。載體片段也可以同樣的方法。因為像幾十bp的小片段，回收柱回收不回來。所以都可以直接用DNA回收柱直接回收。 |
25樓2011-08-16 09:00:22
26樓2011-08-20 13:49:58
27樓2011-08-21 11:13:48
28樓2011-08-21 11:17:29
29樓2011-08-21 11:20:04
31樓2011-08-23 16:19:46
32樓2011-10-11 07:56:12
33樓2011-10-11 14:05:23
34樓2012-05-09 10:15:20
35樓2012-06-28 16:31:03
36樓2013-01-04 16:51:20
37樓2013-01-04 16:58:25
38樓2013-01-06 15:27:17
39樓2013-08-26 20:30:25
40樓2013-08-27 04:34:16
簡單回復
2011-08-10 10:50
回復
nanocyq9樓
2011-08-10 13:43
回復
2011-08-15 13:15
回復
fruitbbs30樓
2011-08-21 16:38
回復
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 shuihaizi 的主題更新
| 40 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +3 | z1z2z3879 2026-03-18 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +3 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +3 | Tyoumou 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化學工程321分求調(diào)劑 +15 | 大米飯！ 2026-03-15 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 材料，紡織，生物（0856、0710），化學招生啦 +3 | Eember. 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +6 | 為學666 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +8 | 一定有學上- 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 本人考085602 化學工程 專碩 +16 | 不知道叫什么！ 2026-03-15 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 【0856】化學工程（085602）313 分，本科學科評估A類院�；瘜W工程與工藝，誠求調(diào)劑 +7 | 小劉快快上岸 2026-03-11 | 8/400 |
|
|
|
[考博] 東華理工大學化材專業(yè)26屆碩士博士申請 +6 | zlingli 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +4 | 學員97LZgn 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 一定有學上- 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +5 | 超級伊昂大王 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +8 | 困于星晨 2026-03-12 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿211化學學碩310分求調(diào)劑 +8 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +3 | 小匕仔汁 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 309分請求調(diào)劑 +7 | dtdxzxx 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 是Lupa啊 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 277求調(diào)劑 +4 | anchor17 2026-03-12 | 4/200 |
|