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空藍(lán)Y劫新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
westen blot 染色
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最近做western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果總是不理想，不出條帶。開(kāi)始時(shí)以為是轉(zhuǎn)膜的問(wèn)題，但染色后的膜在放置一晚上后，染色液蒸發(fā)掉了，這個(gè)時(shí)候在膜上竟然出現(xiàn)條帶了！！， 這是怎么個(gè)情況呢？？ 染色液不知道是什么東西，見(jiàn)上面有 amresco 字樣， 膜的話(huà)上有Hybond字樣，使用前100%甲醇浸泡10s. |
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2樓2011-08-12 09:34:20
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4樓2011-08-12 10:52:12
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7樓2011-08-12 17:11:07
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
lstt09nk(金幣+3): 感謝參與 2011-08-12 22:56:59
空藍(lán)Y劫(金幣+1): 額，三明治沒(méi)寫(xiě)全，從下到上，依次是：黑板，海綿，濾紙，膠，膜，濾紙，海綿，白板。這個(gè)順序沒(méi)問(wèn)題吧？黑板靠黑面放 2011-08-15 08:51:30
lstt09nk(金幣+3): 感謝參與 2011-08-12 22:56:59
空藍(lán)Y劫(金幣+1): 額，三明治沒(méi)寫(xiě)全，從下到上，依次是：黑板，海綿，濾紙，膠，膜，濾紙，海綿，白板。這個(gè)順序沒(méi)問(wèn)題吧？黑板靠黑面放 2011-08-15 08:51:30
| 當(dāng)然有這種情況。但一般來(lái)說(shuō)200ma一小時(shí)對(duì)濕法也不算太大。不知道你的轉(zhuǎn)膜裝置是多大，我以前一直350ma1小時(shí)的。pvdf膜極性較強(qiáng)能吸附的蛋白多，很難全部跑到膜外。你的預(yù)染marker在哪里？那個(gè)是最直接的證據(jù)，轉(zhuǎn)不上應(yīng)該還在膠里，轉(zhuǎn)過(guò)頭了既不在膠上也不在膜上。還有你上面寫(xiě)的那個(gè)三明治，怎么沒(méi)有看見(jiàn)膠。膠和膜貼合是否緊密沒(méi)有氣泡？ |
8樓2011-08-12 22:22:44
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
看天(金幣+3): 鼓勵(lì)回答 2011-08-13 23:38:45
看天(金幣+3): 鼓勵(lì)回答 2011-08-13 23:38:45
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1、根據(jù)彩色marker判斷跑電泳時(shí)是否跑開(kāi)。marker開(kāi)了，蛋白自然跑開(kāi)。 2、轉(zhuǎn)膜要根據(jù)PVDF膜上是否有marker條帶判斷，有就是轉(zhuǎn)上去了。如果轉(zhuǎn)過(guò)，會(huì)被轉(zhuǎn)到濾紙上。轉(zhuǎn)的不徹底會(huì)在膠上游殘留。 3、染色是染膠。麗春紅染色幾個(gè)小時(shí)，看看就知道了。有帶就說(shuō)明你的蛋白沒(méi)問(wèn)題。 |
9樓2011-08-13 17:30:42
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10樓2011-08-13 17:36:09
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