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大米小麥新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于測定筍的多酚氧化酶PPO活性的問題
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| 測定綠竹筍 的PPO活性時(shí)得到的數(shù)值都是負(fù)值，到底是哪里出了問題？誰測過這個(gè)指標(biāo)啊？結(jié)果如何？能不能把步驟寫一下��？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
★
樹樹8013(金幣+1): 謝謝zhouqi0982蟲友參與交流。 2011-08-16 23:17:00
sweety: 回帖置頂 2011-12-30 09:23:33
樹樹8013(金幣+1): 謝謝zhouqi0982蟲友參與交流。 2011-08-16 23:17:00
sweety: 回帖置頂 2011-12-30 09:23:33
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測定PPO活性時(shí)倒沒出現(xiàn)這種問題，不知道樓主采用的是什么。 稱取5g雷竹筍，置于研缽中，加入5mL提取緩沖液（含4% PVP、1 mmol/L PEG，1% Triton X-100），在冰浴條件下研磨成勻漿，四層紗布過濾后，4℃、12000r/min離心20min，上清液，即為粗酶液。配制反應(yīng)體系，包括：l mL 0.05mol/L的鄰二苯酚，4 mL 0.05mol/L、pH 5.5乙酸-乙酸鈉緩沖液。以蒸餾水為參比，加入0.1 mL酶液，在反應(yīng)的15 s開始計(jì)記錄反應(yīng)體系在420 nm的OD值，作為初始值，每隔1 min記錄一次，連續(xù)測定至少六組。 |
2樓2011-08-16 09:11:07
zhouqi0982
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【答案】應(yīng)助回帖
樹樹8013(食品EPI+1): 謝謝用心解答，獎(jiǎng)勵(lì)EPI一枚。 2011-08-20 01:55:10
大米小麥(金幣+5): 2011-08-29 17:56:18
sweety: 回帖置頂 2011-12-30 09:23:41
大米小麥(金幣+5): 2011-08-29 17:56:18
sweety: 回帖置頂 2011-12-30 09:23:41
| 樓主的測定方法和我的有些不同，不過就我個(gè)人提出幾點(diǎn)看法。第一，離心的時(shí)候應(yīng)該采取的冷凍離心，因?yàn)闇y定的是酶活，對(duì)結(jié)果可能有一定的影響，確保結(jié)果的的準(zhǔn)確性，采取冷凍離心比較好。第二，吸光度值不一定都是產(chǎn)生有色物質(zhì)來測定的，有的是產(chǎn)生的一些物質(zhì)，但這些物質(zhì)的吸光性是不一樣的，在測定PPO這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，顏色變化不是很明顯，但OD值是有變化的（就我的實(shí)驗(yàn)步驟而言的）；第三；兒茶酚溶液應(yīng)該采用緩沖液配置的；第三，至于測定時(shí)負(fù)值得原因，不太明確，可以給樓主提出幾個(gè)建議，樓主可以去試試，PPO活性測定中，OD值有變化，但不會(huì)太大，樓主可以試試把酶液的濃度提高些，離心時(shí)間延長些，吸取上清液測定的時(shí)候，一定不能吸出懸浮物，另外再把比色皿好好清洗下，看能不能找出些原因。 |
5樓2011-08-19 08:38:50
mixi113
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3樓2011-08-16 09:35:57
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4樓2011-08-16 15:13:39
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6樓2011-08-22 14:56:34
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7樓2011-08-29 16:33:58
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8樓2011-09-01 21:24:45
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9樓2011-09-25 15:28:48
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10樓2011-11-07 16:26:29
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