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huaizhenkai新蟲 (小有名氣)
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[求助]
LPS致炎時(shí)的問題
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近來查文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)篩選抗炎活性時(shí). in vitro, RAW, 提前給藥,孵育一段時(shí)間,再給與lps刺激,然后提取rna, 進(jìn)行PCR分析 in vivo, 也是提前給藥,再給與lps. 想請教一下,如果提前給藥,然后lps刺激,發(fā)現(xiàn)NF-kb 等被抑制, 那么同時(shí)給藥或者先給與LPS 刺激,然后再給藥,對于研究機(jī)理上有什么區(qū)別。 我現(xiàn)在做的一個(gè)藥物,發(fā)現(xiàn)在小鼠急性炎癥模型上(LPS刺激),發(fā)現(xiàn)提前6小時(shí)給藥,也能抑制tnf-a, il-6等細(xì)胞因子的表達(dá),但是從rna 水平,又沒有太大的變化;體外實(shí)驗(yàn),RAW,提前給藥,再用LPS刺激,結(jié)果卻在蛋白水平和RNA水平都受到抑制。 有沒有人幫助解釋一下,可能的作用機(jī)理 同時(shí)能不能設(shè)計(jì)體外實(shí)驗(yàn)來證明該化合物的作用時(shí)間(??) 比如,方案一:提前給藥,共孵育30分鐘,然后換了培養(yǎng)液(是否需要換培養(yǎng)液???),再加入lps 刺激; 方案二:同時(shí)給藥 方案三:先給與LPS刺激30分鐘,換培養(yǎng)液(是否能換培養(yǎng)液??),再給藥, 這三種方案對于試驗(yàn)結(jié)果的解釋,有什么不同呢? 感謝大蝦指教,我只有化學(xué)背景,對分子生物一頭霧水:( |
細(xì)胞實(shí)驗(yàn) |

木蟲 (正式寫手)
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那當(dāng)然不同啊。 提前給藥,先擬制,再給LPS當(dāng)然沒有多大的效果啊(這相當(dāng)于吃保健品)。 先LPS,炎癥產(chǎn)生了,再給藥物治療,這就想到與臨床上治療。 同時(shí)給藥,意義不大,說實(shí)話。 我也是做炎癥痛,我主要是做動(dòng)物實(shí)驗(yàn),細(xì)胞實(shí)驗(yàn)導(dǎo)師不推薦做。 LPS導(dǎo)致炎癥痛的機(jī)理就是通過增加NF kappa B的這個(gè)途徑的。我最近也做了這么一篇文章。都在寫了。 |

新蟲 (小有名氣)

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哦,那你要搞明白,加藥是阻斷哪個(gè)通路。我導(dǎo)師一般不贊同先給藥,作為治療的話,還是先給LPS后給藥。 方案一:先給藥的目的,可能是先將LPS引起的信號通路阻斷,或者延持LPS導(dǎo)致的效果,分析時(shí),大部分都用延遲了LPS引起的效果。為什么這么做,是因?yàn)樗幬镄枰欢ǖ淖饔脮r(shí)間,要是藥物不能通過細(xì)胞膜,那還是比較麻煩。、 方案二:建立在方案一上的,同時(shí)孵育,可能會(huì)出現(xiàn)多種結(jié)果,可能LPS的效果被阻斷,也可能要過會(huì)才能阻斷。結(jié)果就是為了解釋藥物的作用時(shí)間的。 方案三:先LPS,lps導(dǎo)致的免疫反應(yīng)都產(chǎn)生了,再給藥,目的是為了驗(yàn)證這個(gè)藥物在治療LPS導(dǎo)致的作用上有沒有效果。 你要做的話,建議方案一三都要做,至于體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)的不一樣,很正常。 |

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