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huaizhenkai新蟲 (小有名氣)
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[求助]
LPS致炎時的問題
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近來查文獻，發(fā)現(xiàn)篩選抗炎活性時. in vitro, RAW, 提前給藥，孵育一段時間，再給與lps刺激，然后提取rna, 進行PCR分析 in vivo, 也是提前給藥，再給與lps. 想請教一下，如果提前給藥，然后lps刺激，發(fā)現(xiàn)NF-kb 等被抑制， 那么同時給藥或者先給與LPS 刺激，然后再給藥，對于研究機理上有什么區(qū)別。 我現(xiàn)在做的一個藥物，發(fā)現(xiàn)在小鼠急性炎癥模型上（LPS刺激），發(fā)現(xiàn)提前6小時給藥，也能抑制tnf-a, il-6等細胞因子的表達，但是從rna 水平，又沒有太大的變化；體外實驗，RAW,提前給藥，再用LPS刺激，結果卻在蛋白水平和RNA水平都受到抑制。 有沒有人幫助解釋一下，可能的作用機理 同時能不能設計體外實驗來證明該化合物的作用時間（？？） 比如，方案一：提前給藥，共孵育30分鐘，然后換了培養(yǎng)液(是否需要換培養(yǎng)液？？？)，再加入lps 刺激； 方案二：同時給藥 方案三：先給與LPS刺激30分鐘，換培養(yǎng)液（是否能換培養(yǎng)液？？),再給藥， 這三種方案對于試驗結果的解釋，有什么不同呢？ 感謝大蝦指教，我只有化學背景，對分子生物一頭霧水：（ |
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 細胞實驗 |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金幣+8): 感謝參與 2011-08-22 12:39:03
lstt09nk(BioEPI+1): 2011-08-22 12:39:19
lstt09nk(金幣+8): 感謝參與 2011-08-22 12:39:03
lstt09nk(BioEPI+1): 2011-08-22 12:39:19
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哦，那你要搞明白，加藥是阻斷哪個通路。我導師一般不贊同先給藥，作為治療的話，還是先給LPS后給藥。 方案一：先給藥的目的，可能是先將LPS引起的信號通路阻斷，或者延持LPS導致的效果，分析時，大部分都用延遲了LPS引起的效果。為什么這么做，是因為藥物需要一定的作用時間，要是藥物不能通過細胞膜，那還是比較麻煩。、 方案二：建立在方案一上的，同時孵育，可能會出現(xiàn)多種結果,可能LPS的效果被阻斷，也可能要過會才能阻斷。結果就是為了解釋藥物的作用時間的。 方案三：先LPS，lps導致的免疫反應都產(chǎn)生了，再給藥，目的是為了驗證這個藥物在治療LPS導致的作用上有沒有效果。 你要做的話，建議方案一三都要做，至于體內和體外實驗出現(xiàn)的不一樣，很正常。 |
4樓2011-08-22 08:29:00
huaizhenkai
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5樓2011-08-22 12:19:37
sgk555
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8樓2011-09-01 16:04:00
【答案】應助回帖
★ ★ ★
adslye(金幣+3): 感謝交流~祝順利！ 2011-08-21 15:52:46
huaizhenkai(金幣+2): 三者的具體機理區(qū)別沒有說的特別清楚，但是還是有幫助的 2011-08-21 19:26:59
adslye(金幣+3): 感謝交流~祝順利！ 2011-08-21 15:52:46
huaizhenkai(金幣+2): 三者的具體機理區(qū)別沒有說的特別清楚，但是還是有幫助的 2011-08-21 19:26:59
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那當然不同啊。 提前給藥，先擬制，再給LPS當然沒有多大的效果�。ㄟ@相當于吃保健品）。 先LPS，炎癥產(chǎn)生了，再給藥物治療，這就想到與臨床上治療。 同時給藥，意義不大，說實話。 我也是做炎癥痛，我主要是做動物實驗，細胞實驗導師不推薦做。 LPS導致炎癥痛的機理就是通過增加NF kappa B的這個途徑的。我最近也做了這么一篇文章。都在寫了。 |
2樓2011-08-20 10:32:05
huaizhenkai
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3樓2011-08-21 19:28:36
6樓2011-08-23 08:15:52
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