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huaizhenkai新蟲 (小有名氣)
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[求助]
LPS致炎時(shí)的問題
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近來查文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)篩選抗炎活性時(shí). in vitro, RAW, 提前給藥，孵育一段時(shí)間，再給與lps刺激，然后提取rna, 進(jìn)行PCR分析 in vivo, 也是提前給藥，再給與lps. 想請教一下，如果提前給藥，然后lps刺激，發(fā)現(xiàn)NF-kb 等被抑制， 那么同時(shí)給藥或者先給與LPS 刺激，然后再給藥，對于研究機(jī)理上有什么區(qū)別。 我現(xiàn)在做的一個(gè)藥物，發(fā)現(xiàn)在小鼠急性炎癥模型上（LPS刺激），發(fā)現(xiàn)提前6小時(shí)給藥，也能抑制tnf-a, il-6等細(xì)胞因子的表達(dá)，但是從rna 水平，又沒有太大的變化；體外實(shí)驗(yàn)，RAW,提前給藥，再用LPS刺激，結(jié)果卻在蛋白水平和RNA水平都受到抑制。 有沒有人幫助解釋一下，可能的作用機(jī)理 同時(shí)能不能設(shè)計(jì)體外實(shí)驗(yàn)來證明該化合物的作用時(shí)間（？？） 比如，方案一：提前給藥，共孵育30分鐘，然后換了培養(yǎng)液(是否需要換培養(yǎng)液？？？)，再加入lps 刺激； 方案二：同時(shí)給藥 方案三：先給與LPS刺激30分鐘，換培養(yǎng)液（是否能換培養(yǎng)液？？),再給藥， 這三種方案對于試驗(yàn)結(jié)果的解釋，有什么不同呢？ 感謝大蝦指教，我只有化學(xué)背景，對分子生物一頭霧水：（ |
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 細(xì)胞實(shí)驗(yàn) |
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9樓2012-02-27 19:20:35
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
adslye(金幣+3): 感謝交流~祝順利！ 2011-08-21 15:52:46
huaizhenkai(金幣+2): 三者的具體機(jī)理區(qū)別沒有說的特別清楚，但是還是有幫助的 2011-08-21 19:26:59
adslye(金幣+3): 感謝交流~祝順利！ 2011-08-21 15:52:46
huaizhenkai(金幣+2): 三者的具體機(jī)理區(qū)別沒有說的特別清楚，但是還是有幫助的 2011-08-21 19:26:59
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那當(dāng)然不同啊。 提前給藥，先擬制，再給LPS當(dāng)然沒有多大的效果�。ㄟ@相當(dāng)于吃保健品）。 先LPS，炎癥產(chǎn)生了，再給藥物治療，這就想到與臨床上治療。 同時(shí)給藥，意義不大，說實(shí)話。 我也是做炎癥痛，我主要是做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)導(dǎo)師不推薦做。 LPS導(dǎo)致炎癥痛的機(jī)理就是通過增加NF kappa B的這個(gè)途徑的。我最近也做了這么一篇文章。都在寫了。 |
2樓2011-08-20 10:32:05
huaizhenkai
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
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- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2011-08-21 19:28:36
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金幣+8): 感謝參與 2011-08-22 12:39:03
lstt09nk(BioEPI+1): 2011-08-22 12:39:19
lstt09nk(金幣+8): 感謝參與 2011-08-22 12:39:03
lstt09nk(BioEPI+1): 2011-08-22 12:39:19
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哦，那你要搞明白，加藥是阻斷哪個(gè)通路。我導(dǎo)師一般不贊同先給藥，作為治療的話，還是先給LPS后給藥。 方案一：先給藥的目的，可能是先將LPS引起的信號通路阻斷，或者延持LPS導(dǎo)致的效果，分析時(shí)，大部分都用延遲了LPS引起的效果。為什么這么做，是因?yàn)樗幬镄枰欢ǖ淖饔脮r(shí)間，要是藥物不能通過細(xì)胞膜，那還是比較麻煩。、 方案二：建立在方案一上的，同時(shí)孵育，可能會(huì)出現(xiàn)多種結(jié)果,可能LPS的效果被阻斷，也可能要過會(huì)才能阻斷。結(jié)果就是為了解釋藥物的作用時(shí)間的。 方案三：先LPS，lps導(dǎo)致的免疫反應(yīng)都產(chǎn)生了，再給藥，目的是為了驗(yàn)證這個(gè)藥物在治療LPS導(dǎo)致的作用上有沒有效果。 你要做的話，建議方案一三都要做，至于體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)的不一樣，很正常。 |
4樓2011-08-22 08:29:00
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