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bear0329金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
土壤真菌PCR，引物選擇問(wèn)題
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各位蟲(chóng)友： 大家好!我是做土壤DNA提取后，用通用引物對(duì)真菌ITS片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，目的條帶很暗，條件和體系優(yōu)化后效果不好。我想問(wèn)是不是引物問(wèn)題呢？一般土壤真菌ITS序列的通用引物用哪些呢？謝謝��！ |
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jerryzyy
金蟲(chóng) (小有名氣)
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8樓2012-08-21 11:05:56
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
bear0329(金幣+1): 謝謝啊~擴(kuò)出來(lái)都是很淡的，加大了酶量稍微好點(diǎn) 2011-08-24 15:28:57
dhd997(金幣+3): good 2011-08-24 19:35:06
bear0329(金幣+1): 2011-08-28 21:15:29
bear0329(金幣+1): 謝謝啊~擴(kuò)出來(lái)都是很淡的，加大了酶量稍微好點(diǎn) 2011-08-24 15:28:57
dhd997(金幣+3): good 2011-08-24 19:35:06
bear0329(金幣+1): 2011-08-28 21:15:29
| 有2個(gè)問(wèn)題需要注意：（1）總DNA是否腐殖酸高，顏色越深則越是。解決的辦法是提取時(shí)減少土樣或增加提取藥品的量；PCR前對(duì)總DNA進(jìn)行稀釋。（2）引物的選擇。也可采用nested PCR。 |
2樓2011-08-24 11:22:06
bear0329
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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送鮮花一朵 4樓2011-08-29 14:00:09
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6樓2011-10-18 14:55:47
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