 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3453 | 回復(fù): 12 | |||
| 本帖產(chǎn)生 3 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
分子克隆連接問題！
|
|||
本人最近想把一個(gè)用Xho I 和Nde I雙酶切獲得的基因片段連接到用同樣的酶進(jìn)行酶切完畢的PET28b（+）質(zhì)粒中，上述兩個(gè)酶的說明書（寶生物）說這兩個(gè)酶進(jìn)行酶切獲得的片段需要按照平末端連接條件進(jìn)行連接，小弟以前沒做過克隆，跪求高手給出個(gè)連接條件吧，越詳細(xì)越好，我都失敗一周了。。。。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有262人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 構(gòu)建pBI121表達(dá)載體，目的基因與載體連接不上
已經(jīng)有54人回復(fù)
- 基因克隆中酶切連接問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】分子克隆 雙tag
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求助關(guān)于轉(zhuǎn)化的問題？
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【求助】基因克隆T載體酶切問題等
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 求助：關(guān)于基因表達(dá)中調(diào)控蛋白和轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白的連接和表達(dá)
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【分享】分子克隆實(shí)驗(yàn)專題-（二）酶切連接要點(diǎn)探討
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于分子克隆的技術(shù)問題，很糾結(jié)！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】分子克隆后M13引物PCR擴(kuò)增
已經(jīng)有32人回復(fù)
- 【求助/交流】急！克隆快做了一個(gè)月了，就是做不出來
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 【求助/交流】目的基因連接表達(dá)載體后涂板不長菌
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【問題反饋】質(zhì)粒雙酶切切下120bp每次都看不到？
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 【求助/交流】連接表達(dá)載體PET-28A失敗原因
已經(jīng)有23人回復(fù)
rodickholm
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 2044.2
- 散金: 1564
- 紅花: 7
- 帖子: 675
- 在線: 235.3小時(shí)
- 蟲號: 562916
- 注冊: 2008-05-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 農(nóng)業(yè)昆蟲學(xué)
3樓2011-08-26 21:46:52
rodickholm
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 2044.2
- 散金: 1564
- 紅花: 7
- 帖子: 675
- 在線: 235.3小時(shí)
- 蟲號: 562916
- 注冊: 2008-05-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 農(nóng)業(yè)昆蟲學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
yitonghui(金幣+5): 2011-08-27 09:05:27
dhd997(金幣+3): good 2011-08-27 09:23:04
dhd997: 資料可以上傳啊，傳上來大家共享啊 2011-08-27 09:23:36
yitonghui(金幣+5): 2011-08-27 09:05:27
dhd997(金幣+3): good 2011-08-27 09:23:04
dhd997: 資料可以上傳啊，傳上來大家共享啊 2011-08-27 09:23:36
|
載體和片段mol比 1:10 1:5 1:3 連接，都試試 [(加入載體的量（ ng ）×插入片段大�。� kb ）)/載體大小（ kb ） ] ×插入片段和載體的摩爾比 = 插入片段的量（ ng ） 可以發(fā)封郵件給我，我發(fā)些資料給你 rodickholmes@163.com |
2樓2011-08-26 21:45:10
xbl3688
銀蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 12 (小學(xué)生)
- 金幣: 1240.1
- 紅花: 1
- 帖子: 311
- 在線: 104.7小時(shí)
- 蟲號: 1348397
- 注冊: 2011-07-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
yitonghui(金幣+5): 2011-08-27 09:05:38
dhd997(金幣+3): good 2011-08-27 09:23:49
yitonghui(金幣+5): 2011-08-27 09:05:38
dhd997(金幣+3): good 2011-08-27 09:23:49
|
1、 Xho I和Nde I內(nèi)切酶切出來的都是粘性末端，PET28b載體中有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)，用普通的T4連接酶都可以的； 2、至于連接條件是跟各公司的酶性質(zhì)相關(guān)的，我列一下我用的兩個(gè)酶的連接條件： 10ul體系: T4ligase buffer 0.5ul T4ligase 0.5ul 目的基因 7ul 載體 1ul ddH2O 1ul (目的基因與載體的比例可以視回收樣品的濃度，片段大小具體情況調(diào)整) TaKaRa公司的T4連接酶，4℃ 24h(或者 16℃ 12h)； Fermentas公司的T4連接酶，22℃ 3-4h。 |
4樓2011-08-26 22:28:11
quiller2000
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 160 (高中生)
- 貴賓: 0.114
- 金幣: 2752.9
- 散金: 50
- 紅花: 26
- 帖子: 1168
- 在線: 167.3小時(shí)
- 蟲號: 895537
- 注冊: 2009-11-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
5樓2011-08-26 23:19:14
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +11 | 一樣YWY 2026-04-01 | 11/550 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥 初試274求調(diào)劑 +5 | 小叮當(dāng)來了 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
[考研] 358求調(diào)劑 +3 | 王向陽花 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求0861交通運(yùn)輸專碩or材料專碩調(diào)劑 +4 | 勒布朗@ 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 初試301，代碼085701環(huán)境工程，本碩一致，四六級已過，有二區(qū)一作，共發(fā)表5篇論文 +3 | axibli 2026-04-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)308分求調(diào)劑（一志愿華東師大） +3 | 相信必會光芒萬?/a> 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 254材料與化工求調(diào)劑 +3 | 翰冬林楠 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 本科211生物醫(yī)學(xué)工程085409求調(diào)劑339分 +7 | 里子木yy 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +3 | lxb598 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿大連理工大學(xué)，機(jī)械工程學(xué)碩，341 +3 | 西瓜田的守望者 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600，專業(yè)課化工原理，320分求調(diào)劑 +6 | 大饞小子 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 一志愿大連理工大學(xué)材料求調(diào)劑
+6
|
Gymno 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工專碩378求調(diào)劑 +3 | 塔比烏斯 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程求調(diào)劑 +11 | 多久上課 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 11408總分309，一志愿東南大學(xué)求調(diào)劑，不挑專業(yè) +5 | 天賦帶到THU 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | @MZB382400 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境科學(xué)與工程334分求調(diào)劑 +6 | 王一一依依 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +10 | 彼岸t 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +8 | 邱gl 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑，一志愿南農(nóng)083200食品科學(xué)與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|