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njunkai新蟲 (初入文壇)
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[求助]
進行羥胺裂解后，進行蛋白的二次過親和層析住純化問題�。。�！求助啊 �。�！
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做融合蛋白的分離純化，第一次純化以1ml破菌后的融合蛋白溶液：0.4ml的親和層析樹脂進行純化去除雜蛋白，基本可以洗脫完全雜蛋白，這親和樹脂的量是足夠的。然后將洗脫的融合蛋白進行透析復(fù)性，冷凍干燥。 通過其羥胺裂解位點來裂解開目的蛋白和載體蛋白。。。羥胺裂解由于效率不高，故其還有剩余的融合蛋白，所以裂解后電泳的條帶就有三條了：未裂解的融合蛋白、載體蛋白和目的蛋白。現(xiàn)在進行二次過親和層析柱，因為參照前面第一次純化，羥胺裂解，理應(yīng)這羥胺裂解蛋白濃度是比第一次純化時蛋白要低的，可按照這個裂解后的溶液按照1ml裂解液：0.4ml親和層析樹脂進行二次純化，可洗脫下來的就是不單單只有目的蛋白啊 �。�！這怎么回事呢？麻煩各位懂的大蝦們幫小弟解答下�。�！謝謝啊�。�！ |
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3樓2011-08-28 15:57:31
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