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yesucao木蟲 (正式寫手)
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連接后轉(zhuǎn)化子PCR出現(xiàn)非特異性的條帶
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實驗主要內(nèi)容: 1、將目的基因和已經(jīng)連有啟動子的載體連接,挑單菌落PCR驗證是否含有目的條帶 2、挑取能 P 出條帶的單菌落,搖菌,保藏,提質(zhì)粒 3、用提取的質(zhì)粒,再次PCR驗證是否含有啟動子基因 問題: PCR驗證是否含有啟動子的時候,跑膠結(jié)果顯示:除了自己的啟動子條帶,還出現(xiàn)2條非特異性的條帶,但是陽性對照只有一條,之前一直是用這個體系,出現(xiàn)這樣的問題,很怕是自己搖菌的過程中出現(xiàn)污染所致。 還請各位幫忙分析一下。 目前本人已經(jīng)在做質(zhì)粒的單雙酶切驗證,結(jié)果沒出來。 如圖 左一:陽性對照(啟動子條帶1000bp多一點) 右一:Marker(4500、3000、2000、1200、800、500、200) 其他全部是質(zhì)粒PCR(每個做了兩個平行,一共7個) |
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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