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天鳥木蟲 (正式寫手)
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[交流]
連接轉(zhuǎn)化后菌落PCR驗(yàn)證出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增 已有4人參與
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我的目的片段560bp，連接轉(zhuǎn)化后，進(jìn)行菌落PCR，出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。如下圖 在500-300bp之間有個(gè)條帶，不知道是什么？我的載體是PMD 18-T，謝謝大家 |
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2樓2011-08-10 23:08:14
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+4): 就是這樣！ 2011-08-11 11:59:38
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+4): 就是這樣！ 2011-08-11 11:59:38
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有非特異性條帶很正常，你可以再做一次，將退火溫度提高看看，如果非特異性條帶依然存在，只能說明你的引物特異性不是很好； 不過進(jìn)行PCR驗(yàn)證連接只是一個(gè)初步篩選的一個(gè)過程，沒有必要糾結(jié)這么多，下一步你可以將能夠擴(kuò)增出目的片段的那個(gè)菌進(jìn)行質(zhì)粒的提取，然后進(jìn)行酶切驗(yàn)證，如果都沒有什么問題，那么克隆就算做成功了，就可以進(jìn)行下游工作了！ 祝你好運(yùn)！ |
5樓2011-08-11 09:17:57
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6樓2011-08-11 10:00:22
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