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huojinlong9287

銀蟲 (小有名氣)

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[求助] 漢譯英生物學(xué)方向

為了構(gòu)建綠色熒光蛋白AcGFP1基因的原核表達(dá)載體pET32a-AcGFP1，并通過誘導(dǎo)使其在大腸桿菌中高效表達(dá)，本研究以pIRES-AcGFP1質(zhì)粒為模板，采用PCR技術(shù)特異性擴增綠色熒光蛋白（AcGFP1）基因，并通過酶切和連接使其與原核表達(dá)載體pET32a（+）構(gòu)成重組子，經(jīng)PCR、酶切和測序鑒定后，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta（DE3），用不同濃度的異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá)綠色熒光蛋白，并通過15%SDS-PAGE鑒定。結(jié)果顯示重組質(zhì)粒pET32a-AcGFP1中的AcGFP1序列與Clontech公司的pIRES-AcGFP1質(zhì)粒的AcGFP1序列完全一致，說明成功構(gòu)建了含有綠色熒光蛋白AcGFP1的原核表達(dá)質(zhì)粒。pET32a-AcGFP1轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞Rosetta（DE3）后，經(jīng)不同濃度的IPTG誘導(dǎo)后均獲得高效表達(dá)。SDS-PAGE驗證的目的蛋白相對分子量約為44000Da，與理論預(yù)期值相符。

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1樓 2011-09-08 14:07:47

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金蟲 (小有名氣)

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愛與雨下(金幣+2): 鼓勵一下！~ 2011-09-09 12:08:09
huojinlong9287(金幣+60, 翻譯EPI+1): 翻譯的不完全 2011-09-11 09:22:48
sltmac(金幣+10): 2011-09-15 08:02:01
sltmac(金幣+10): 2011-09-15 08:02:05
sltmac: 歡迎常來本版交流~ 2011-09-15 08:02:14

The aim of this study was to construct prokaryotic expression vector pET32a-AcGFP1, and its high level expression in E. coli cell. AcGFP1 gene was amplified from vector pIRES-AcGFP1 by PCR method, and was inserted into prokaryotic expression vector pET32a(+). The resulting pET32a-AcGFP1 was transformed into E. coli Rosetta(DE3) for expression followed by induction with isopropyl β-D-thiogalactopyranoside (IPTG). Whole-cell extracts were separated on 15% SDS-PAGE. AcGFP1 gene in pET32a-AcGFP1 was consistent with related gene in pIRES-AcGFP1 from Clontech Ltd, indicating prokaryotic expression vector with AcGFP1 gene was constructed successfully. High level expression was conducted with transformed E. coli Rosetta(DE3) after IPTG induction. A strong induction of a 44 kD protein was detected in SDS-PAGE, which was in correspondence with the theoretic value.

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2樓2011-09-09 11:18:49

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