 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1809 | 回復(fù): 6 | |||||
| 本帖產(chǎn)生 2 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||||
yesucao木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
[交流]
電擊轉(zhuǎn)化
|
||||
| 目前實(shí)驗(yàn)需求，要求采用電擊法轉(zhuǎn)化10.2kb質(zhì)粒到枯草芽孢桿菌中，實(shí)驗(yàn)室沒(méi)人做過(guò)，質(zhì)粒有點(diǎn)大，知道有難度，所以特來(lái)取經(jīng)，不知道有什么需要注意的地方嗎？？？還請(qǐng)各位大蝦幫忙��！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 實(shí)驗(yàn)技術(shù)、方法交流 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有187人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
西安征結(jié)婚女友
+1/283
-
【招聘】溫州醫(yī)科大學(xué)/附屬醫(yī)院/甌江實(shí)驗(yàn)室李校堃院士團(tuán)隊(duì)誠(chéng)聘博士后和科研人員
+1/188
-
西南科大輻射防護(hù)材料課題組接收材料與化學(xué)背景碩士研究生
+3/122
-
青島大學(xué)功能紡織品與先進(jìn)材料研究院2026碩士研究生招生調(diào)劑
+1/97
-
【招聘】清北（濟(jì)南）生物科技招聘AI制藥研發(fā)計(jì)算人才
+1/93
-
上海高校招收化學(xué)，材料，環(huán)境，化工等專業(yè)基礎(chǔ)的同學(xué)攻讀碩士研究生
+1/82
-
沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)-環(huán)境電化學(xué)技術(shù)研究團(tuán)隊(duì)-招收碩士研究生
+3/54
-
國(guó)家工程物理交叉科學(xué)研究中心招收凝聚態(tài)物理及相關(guān)專業(yè)碩士研究生一名
+1/40
-
2026 年山東建筑大學(xué)金屬增材制造方向碩士研究生調(diào)劑公告
+1/39
-
歡迎08開(kāi)頭或部分07開(kāi)頭的有緣人報(bào)考
+1/33
-
【哈工程】核學(xué)院某課題組招收全日制調(diào)劑研究生
+1/24
-
南京林業(yè)大學(xué)-國(guó)家級(jí)青年人才團(tuán)隊(duì) 招2026級(jí)博士、碩士（合成化學(xué)、植物化學(xué)方向）
+1/20
-
博士科研人員（化學(xué)過(guò)程工藝與硬件系統(tǒng)工程）
+1/12
-
蘇州初創(chuàng)公司誠(chéng)聘有機(jī)合成化學(xué)家
+1/10
-
中國(guó)地質(zhì)大學(xué)（北京)工程技術(shù)學(xué)院安老師組招收2026調(diào)劑生
+1/8
-
2026年中國(guó)科學(xué)院城市環(huán)境所與福建農(nóng)林大學(xué)聯(lián)合培養(yǎng)碩士研究生項(xiàng)目介紹
+1/6
-
尋找26博士生導(dǎo)師
+1/4
-
長(zhǎng)江師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院2026年碩士研究生接收調(diào)劑的通知
+1/4
-
武漢理工大學(xué)船海與能源動(dòng)力工程學(xué)院劉鵬飛院士團(tuán)隊(duì)博士后招聘啟事
+1/2
-
英國(guó)劍橋好房出租
+1/1
ganchao1776
至尊木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- MolEPI: 12
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
- 金幣: 11613.1
- 帖子: 3402
- 在線: 900.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 330935
7樓2011-09-14 22:00:46
yesucao
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 51 (初中生)
- 金幣: 3877.1
- 帖子: 374
- 在線: 203.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 810829
2樓2011-09-10 15:38:09
cdl007
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 41
- 應(yīng)助: 46 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.025
- 金幣: 2570.6
- 帖子: 545
- 在線: 123.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 275133
★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
wanhscn(金幣+4): 辛苦！ 2011-09-10 17:17:08
amisking(MolEPI+1): 2011-09-10 23:12:19
yesucao(金幣+5): 謝謝你給的材料，我會(huì)認(rèn)真參考的 2011-09-13 09:45:15
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
wanhscn(金幣+4): 辛苦！ 2011-09-10 17:17:08
amisking(MolEPI+1): 2011-09-10 23:12:19
yesucao(金幣+5): 謝謝你給的材料，我會(huì)認(rèn)真參考的 2011-09-13 09:45:15
|
電擊時(shí)，鹽要洗干凈，不然電流過(guò)大會(huì)爆杯 這有個(gè)protocol可以參考一下 第一天： 1. 將適合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上，在37°C下過(guò)夜培養(yǎng) 2. 高溫滅菌大的離心瓶（250-500ml）以備第二天搖瓶用 3. 準(zhǔn)備幾瓶滅菌水（總量約1.5升），保存于冷凍室中以備第二天重懸浮細(xì)胞用 第二天： 4. 轉(zhuǎn)移0.2-1ml過(guò)夜培養(yǎng)物至裝有500ml LB（或其他營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基）的1-2升擋板搖瓶中 5. 37°C下劇烈振蕩培養(yǎng)2-6小時(shí) 6. 定時(shí)監(jiān)控O.D.600值（培養(yǎng)1小時(shí)后每半小時(shí)測(cè)定一次） 7. 當(dāng)O.D.600值達(dá)到0.5-1.0時(shí)，從搖床中取出搖瓶，置于冰上冷卻至少15分鐘（需要的話這種方式可以存放培養(yǎng)液數(shù)小時(shí)） 8. 細(xì)胞在4°C 5000g下離心15分鐘，棄上清液（如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一兩天） 9. 用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞。先用渦旋儀或吸液管重懸浮細(xì)胞于少量體積中（幾毫升），然后加水稀釋至離心管的2/3體積。 10. 照上面步驟重復(fù)離心，小心棄去上清液 11. 照上面步驟用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞 12. 離心，棄上清液 13. 用20ml滅菌的、冰冷后的10%甘油重懸浮細(xì)胞 14. 照上面步驟離心，小心棄去上清液（沉淀可能會(huì)很松散） 15. 用10%甘油重懸浮細(xì)胞至最終體積為2-3ml 16. 將細(xì)胞按150μl等份裝入微量離心管，于-80°C保存 轉(zhuǎn)化方法: 1. 在冰上解凍電感受態(tài)細(xì)胞添加1-10μl DNA ，冰上培育約5分鐘 2. 添加1-3μl DNA ，冰上培育約5分鐘 3. 轉(zhuǎn)移DNA/細(xì)胞混合物至冷卻后的2mm電穿孔容器（無(wú)泡）中 4. 加載P1000，準(zhǔn)備好300μl LB 或 2xYT 5. 對(duì)電穿孔容器進(jìn)行脈沖（200 歐姆, 25μFd, 2.5 千伏）（檢查時(shí)間常數(shù)，應(yīng)該在3以上） 6. 立即添加300μl 的LB或2xYT至電穿孔容器中 7. 37°C下培養(yǎng)細(xì)胞40分鐘至1小時(shí)以復(fù)原 8. 轉(zhuǎn)移細(xì)胞至適當(dāng)?shù)倪x擇培養(yǎng)基上培養(yǎng) |
3樓2011-09-10 16:39:36
yesucao
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 51 (初中生)
- 金幣: 3877.1
- 帖子: 374
- 在線: 203.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 810829
|
我還想問(wèn)你一些問(wèn)題： 1、 制備感受態(tài)懸浮用的水是什么水？？我看的文獻(xiàn)是用緩沖液來(lái)懸浮細(xì)胞，比如蔗糖加甘油或者一些專用的緩沖液？ 2、 一次性制備這么多的感受態(tài)能放多久？？不是現(xiàn)配現(xiàn)用的嗎？？每一次電擊前都要制備一次感受態(tài)嗎？？ 3、 轉(zhuǎn)化方法中，加載P1000是什么意思？這個(gè)看不懂 4、 我想一次做多個(gè)電擊轉(zhuǎn)化，電擊杯不是要滅菌嗎？這樣是不是我要一次滅菌幾個(gè)滅菌杯？？ 5、 這個(gè)溫度怎么是37度？？不是根據(jù)自己的受體菌溫度來(lái)定的嗎？？我的是枯草芽孢桿菌，溫度是在30度培養(yǎng)最好。 |
4樓2011-09-13 09:41:25
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿武漢理工大學(xué)材料工程（085601） +7 | WW.' 2026-03-23 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +4 | 蝶舞輕繞 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +8 | 15188958825 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085701求調(diào)劑初試286分 +4 | secret0328 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 本科新能源科學(xué)與工程，一志愿華理能動(dòng)285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南大學(xué)化學(xué)0703總分337求調(diào)劑 +5 | niko- 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +3 | 山頂見(jiàn)α 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 蘆lty 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 081200-314 +3 | LILIQQ 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 086000調(diào)劑 +3 | 7901117076 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | Sanmu-124 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 08開(kāi)頭275求調(diào)劑 +4 | 拉誰(shuí)不重要 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +9 | 小蠟新筆 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑323材料與化工 +7 | 1124361 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院-光纖傳感課題組招生-中國(guó)科學(xué)院大學(xué)、深圳理工大學(xué)聯(lián)培 +5 | YangTyu1 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料考研求調(diào)劑 +3 | Dendel 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | plum李子 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)藥學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 開(kāi)開(kāi)心心沒(méi)煩惱 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 石河子大學(xué)（211、雙一流）碩博研究生長(zhǎng)期招生公告 +3 | 李子目 2026-03-22 | 3/150 |
|