 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2458 | 回復(fù): 9 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
[求助]
定量的若干問題，求解答！
|
|||
|
各位大俠，我要做定量了，還有很多細(xì)節(jié)不太明白，請大家?guī)兔饣蟀 ? 我做的是細(xì)菌，我想知道某一功能基因在某一特殊處理下的表達(dá)量與未處理時的差異。這應(yīng)該是相對定量吧。 問題一，做定量是要設(shè)置內(nèi)參的，是吧？而我查到的資料基本都是做真核的，“常用的內(nèi)參基因是beta-actin，GADPH，rRNA基因等”，這句話在很多資料中出現(xiàn)。但是我的材料是細(xì)菌，是原核生物，用什么做為內(nèi)參呢？按說GAPDH和rRNA基因都可以，是吧？但是，因?yàn)槲业木晔俏粗�，我根本不知道它的GAPDH基因序列，所以無法自己設(shè)計(jì)引物，我想是不是這些常用內(nèi)參的引物是通用的呢，結(jié)果我查到的是，不同物種的都不一樣，所以好像我就不能用GADPH做內(nèi)參了吧。好在我對它的16S rDNA已經(jīng)進(jìn)行了測序，得到了序列。請問我是否應(yīng)該用16S做內(nèi)參呢？ 問題二，如何進(jìn)行引物設(shè)計(jì)呢？我指的是用什么軟件好一些？我看到做定量對引物的要求很高。我需要設(shè)計(jì)兩對引物，內(nèi)參的和目的基因的。而且，兩個基因的擴(kuò)增片段大小應(yīng)該基本差不多，是吧？200bp左右最好？ 問題三，標(biāo)準(zhǔn)曲線到底用什么做？我現(xiàn)在有幾個概念比較混亂，實(shí)驗(yàn)組、對照組、標(biāo)準(zhǔn)品、內(nèi)參、目的基因。標(biāo)準(zhǔn)曲線是要拿標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增內(nèi)參基因得到的嗎？還是拿標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增目的基因得到的？另外，我的實(shí)驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品是什么？ 問題四，我看到相對定量方法有兩種：deltadelta Ct法和雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法，我用哪種好呢？deltadelta Ct法結(jié)果需要得到四個Ct值，好像這四個值是在一次定量PCR中得到的，是嗎？也就是說，我對實(shí)驗(yàn)組和對照組都需要同時進(jìn)行內(nèi)參基因和目的基因的擴(kuò)增？而雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法需要對內(nèi)參基因和目的基因分別做標(biāo)準(zhǔn)曲線，是用對照組擴(kuò)增兩個基因得到嗎？ 在線等！求詳解！多謝了…… [ Last edited by dhd997 on 2011-9-13 at 07:51 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有209人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 熒光定量PCR-最全的疑難問題解答！��！
已經(jīng)有294人回復(fù)
- 求高手解救熒光定量的問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 關(guān)于種植黃瓜的若干問題，求各位大俠解答
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求各路聚氨酯高手解答聚脲成膜問題若干
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 做過RNAi或者實(shí)時定量的同學(xué)請幫助我解決一個問題，感激不盡
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 苯乙烯的不對稱環(huán)氧化定量 EE測定相關(guān)問題【截止2011年6月1日】
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助】請教：儀器檢測限 定量限相關(guān)問題？？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助】英國獎學(xué)金的問題～尋牛人求解答
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于熒光定量PCR的小問題,請高手指點(diǎn) 【問題已解決】
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】從RNA到cDNA合成再到克隆PCR的實(shí)驗(yàn)技巧和操作細(xì)節(jié)問題若干，尋求解答
已經(jīng)有12人回復(fù)
wanhscn
木蟲 (職業(yè)作家)
哲學(xué)@草根
- MolEPI: 26
- 應(yīng)助: 53 (初中生)
- 貴賓: 0.87
- 金幣: 3895.7
- 散金: 877
- 紅花: 27
- 沙發(fā): 14
- 帖子: 3642
- 在線: 526.2小時
- 蟲號: 1376762
- 注冊: 2011-08-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
★
西瓜(金幣+1): 版主很熱心啊 2011-09-13 11:57:07
西瓜(金幣+1): 版主很熱心啊 2011-09-13 11:57:07
2樓2011-09-13 08:27:16
wqj1988926
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 40 (小學(xué)生)
- 金幣: 1222
- 散金: 27
- 紅花: 5
- 帖子: 929
- 在線: 225.6小時
- 蟲號: 1156883
- 注冊: 2010-11-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2011-09-13 08:29:38
4樓2011-09-13 09:33:37
wqj1988926
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 40 (小學(xué)生)
- 金幣: 1222
- 散金: 27
- 紅花: 5
- 帖子: 929
- 在線: 225.6小時
- 蟲號: 1156883
- 注冊: 2010-11-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
5樓2011-09-13 12:56:09
6樓2011-09-14 10:53:56
空谷幽風(fēng)
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 32
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.05
- 金幣: 1106.1
- 散金: 500
- 紅花: 13
- 帖子: 615
- 在線: 116.5小時
- 蟲號: 714271
- 注冊: 2009-03-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
西瓜(金幣+3, MolEPI+1): 居然漏評了，失職失職…… 2011-11-01 17:51:35
西瓜(金幣+3, MolEPI+1): 居然漏評了，失職失職…… 2011-11-01 17:51:35
|
1.關(guān)于引物設(shè)計(jì)，現(xiàn)在常用的引物設(shè)計(jì)軟件都可以。 2.關(guān)于定量方法：有相對定量和絕對定量兩種，絕對定量需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線，所以要用到標(biāo)準(zhǔn)品，所謂的標(biāo)準(zhǔn)品就是你要擴(kuò)增的片段，并且要能確定它的拷貝數(shù)，因此標(biāo)準(zhǔn)品的制備是比較困難的；另一種就是相對定量，這種方法通過把參照Ct值調(diào)整到同一水平從而來校正兩個樣本的Ct值，然后對校正后的Ct值進(jìn)行比較分析，根據(jù)你的描述做相對定量就可以了，所以沒必要制備標(biāo)準(zhǔn)品。 3.關(guān)于內(nèi)參，原則上只要能保證這個參照在不同樣本中的穩(wěn)定性就可以，具體選什么還是多查查資料 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
夢想起飛7樓2011-09-14 11:10:05
8樓2011-11-01 16:52:25
tanaluck
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 11.5
- 帖子: 2
- 在線: 2.4小時
- 蟲號: 1630651
- 注冊: 2012-02-21
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
9樓2012-03-14 14:22:27
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
10樓2012-07-19 01:34:05
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 夢想起飛 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +10 | 梁梁校校 2026-03-17 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +7 | 你好明天你好 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 298-一志愿中國農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑 +10 | 手機(jī)用戶 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 350求調(diào)劑 +6 | weudhdk 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +3 | YNRYG 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 尋找調(diào)劑 +4 | 倔強(qiáng)芒? 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +6 | lucky呀呀呀鴨 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 一志愿東華大學(xué)控制學(xué)碩320求調(diào)劑
+3
|
Grand777 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南大，0703化學(xué)，分?jǐn)?shù)336，求調(diào)劑 +3 | 收到VS 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 妮妮ninicgb 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0805材料320求調(diào)劑 +3 | 深海物語 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑 +12 | yangfz 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 22408 344分 求調(diào)劑 一志愿 華電計(jì)算機(jī)技術(shù) +4 | solanXXX 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調(diào)劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 295復(fù)試調(diào)劑
+8
|
簡木ChuFront 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | eation27 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +3 | 妮妮ninicgb 2026-03-17 | 3/150 |
|