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關(guān)于熒光定量PCR要求調(diào)成一致RNA濃度的疑問
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諸位大蝦： 小弟不才，熒光定量放了一段時間后又生疏了。這次是想請大家?guī)兔饣蟆?br /> 做熒光定量（兩步法），前提條件，是把所有樣品的RNA濃度調(diào)成一致后，進行反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA第一鏈，再進行定量。 那么，既然cDNA第一鏈不包含任何信息（小弟的個人理解），需要特異引物才能合成目的基因；同時，考慮到RNA嬌氣無比。那么，是否可以待到合成了cDNA第一鏈后，再進行濃度歸一化呢？ qRT新兵，還望諸位大蝦不吝賜教！ 謝謝 |
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liweiwei0812
銅蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
tank1917(金幣+5): 謝謝您的點撥！的確，小弟沒有想到體系中其他組分的干擾。關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄時對RNA的定量，您有什么好的經(jīng)驗分享嗎？另：您的ID很像本科時帶過我的一個師姐，呵呵。 2011-09-13 17:42:28
dhd997(金幣+2): good 2011-09-13 18:09:33
tank1917(金幣+15): Thanks！ 2011-09-14 09:39:25
tank1917(金幣+5): 謝謝您的點撥！的確，小弟沒有想到體系中其他組分的干擾。關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄時對RNA的定量，您有什么好的經(jīng)驗分享嗎？另：您的ID很像本科時帶過我的一個師姐，呵呵。 2011-09-13 17:42:28
dhd997(金幣+2): good 2011-09-13 18:09:33
tank1917(金幣+15): Thanks！ 2011-09-14 09:39:25
| 需要在逆轉(zhuǎn)錄時對總RNA進行定量，避免CT值差異過大。cDNA定量是不準確的，體系中含有dNTP等，會影響定量結(jié)果。 |
2樓2011-09-13 17:34:47
yzuxhq368
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3樓2011-09-19 22:32:17
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