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關(guān)于熒光定量PCR要求調(diào)成一致RNA濃度的疑問(wèn)
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諸位大蝦: 小弟不才,熒光定量放了一段時(shí)間后又生疏了。這次是想請(qǐng)大家?guī)兔饣蟆?br /> 做熒光定量(兩步法),前提條件,是把所有樣品的RNA濃度調(diào)成一致后,進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,合成cDNA第一鏈,再進(jìn)行定量。 那么,既然cDNA第一鏈不包含任何信息(小弟的個(gè)人理解),需要特異引物才能合成目的基因;同時(shí),考慮到RNA嬌氣無(wú)比。那么,是否可以待到合成了cDNA第一鏈后,再進(jìn)行濃度歸一化呢? qRT新兵,還望諸位大蝦不吝賜教! 謝謝 |
金蟲 (小有名氣)
銅蟲 (小有名氣)
| 需要在逆轉(zhuǎn)錄時(shí)對(duì)總RNA進(jìn)行定量,避免CT值差異過(guò)大。cDNA定量是不準(zhǔn)確的,體系中含有dNTP等,會(huì)影響定量結(jié)果。 |
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