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分子結(jié)構(gòu)金蟲 (小有名氣)
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[求助]
快崩潰了，提個DNA 有這么難嗎？
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 各位師哥師姐師妹師弟，你們是否可以幫助小女子一下，我用天根的試劑盒提取真菌基因組DNA，一步步都是按照步驟來的，可是最后跑電泳卻什么也沒有 ，第一步我聽從上一屆師兄的建議，利用石英砂研磨的菌絲體，研磨的也很細致。但是最后結(jié)果真的讓我快崩潰了。做分子的童鞋真的傷不起啊！ 都做了半個月了，一遍遍的提取，我實在是對自己失望透頂了。關(guān)鍵是找不到原因。這就像是一個靈異事件，真的太鬼魅了！ 感謝大家，小女子這廂有禮啦~  |
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8樓2011-09-15 22:47:34
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金幣+5, MicEPI+1, 應助指數(shù)+1, 的確是個問題 2014-07-21 17:50:31
silicare: 金幣+5, MicEPI+1, 應助指數(shù)+1, 的確是個問題 2014-07-21 17:50:31
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小木蟲有個很蠢的缺點，太久遠的搜索不顯示。 5）DNA抽提液的配置 表 2-5 DNA抽提液的配置 Table 2-5 The component of DNA distilling buffer 成分 濃度 NaCl 200mmol/L EDTA-Na2 4mmol/L SDS 2% Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L 2.2.5.2.1真菌總DNA的提取 （1）接種菌株至液體培養(yǎng)基中，28℃，180rpm振蕩培養(yǎng)3天； （2）用滅菌紗布過濾，并壓干菌體； （3）將菌絲體倒入研缽（滅菌并預冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末狀； （4）將粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液； （5）加等體積苯酚/氯仿，輕輕倒轉(zhuǎn)混合，10000rpm離心10min； （6）取500µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重復步驟（5）； （7）取上清液，加入兩倍體積無水乙醇，-20℃放置30min； （8）10000rpm 離心10min，沉淀物用75%乙醇洗2次后真空干燥； （9）以20µL 1×TE 溶解沉淀物； （10）電泳檢測總DNA的濃度。 圖片1.jpg |
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暖暖ai18樓2014-07-21 13:03:46
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