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donnafeng金蟲 (小有名氣)
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[求助]
怎么提高誘導(dǎo)表達(dá)的目的蛋白含量
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BL21誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白含量不高（ OD0.6~0.8時(shí)添加IPTG 濃度0.1mM 28度誘導(dǎo)6h） 請(qǐng)教提高表達(dá)的方法 1 IPTG到底什么時(shí)候添加 有人說(shuō)能搖到的最高OD值（大約2.0）一半時(shí)添加（即1.0） 有的說(shuō)0.5的時(shí)候添加 到底應(yīng)該選擇什么時(shí)候添加 為什么 2 誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)通氣量高是有利于大腸桿菌的生長(zhǎng)還是有利于蛋白表達(dá) 應(yīng)不應(yīng)該怎么通氣量來(lái)提高目的蛋白表達(dá) 3 有的說(shuō)縮短誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間到2~3h好 有的說(shuō)低溫長(zhǎng)時(shí)間誘導(dǎo)表達(dá)好 到底應(yīng)該怎么選才能提高表達(dá)量 [ Last edited by donnafeng on 2011-9-19 at 14:47 ] |
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wlt728
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7樓2011-09-20 09:46:47
wlt728
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
dhd997(金幣+3): good 2011-09-19 18:04:32
donnafeng(金幣+3): 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)末期還是中期? 大腸桿菌B21是耗氧的 減少裝液量增加轉(zhuǎn)數(shù)不是可以增加溶氧嗎 2011-09-20 08:05:04
dhd997(金幣+3): good 2011-09-19 18:04:32
donnafeng(金幣+3): 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)末期還是中期? 大腸桿菌B21是耗氧的 減少裝液量增加轉(zhuǎn)數(shù)不是可以增加溶氧嗎 2011-09-20 08:05:04
| 1:應(yīng)該在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期是誘導(dǎo)，此時(shí)菌體生長(zhǎng)快速，也能合成更多的目的蛋白。所以你可以做一個(gè)生長(zhǎng)曲線的實(shí)驗(yàn)。2：要是用三角瓶小試的話，你也沒法增加通氣量啊，如果你的菌是耗氧菌，溶氧過(guò)低是會(huì)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的。如果你的目的蛋白是包涵體，可以試試低溫誘導(dǎo)，如果不是，一般37℃誘導(dǎo)4h左右就差不多了。我誘導(dǎo)的時(shí)候，IPTG終濃度為0.1mM，高濃度IPTG是會(huì)抑制菌體生長(zhǎng)的！ |
2樓2011-09-19 15:02:41
lijunqing525
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3樓2011-09-19 15:39:26
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+3): good 2011-09-19 18:04:59
donnafeng(金幣+5): 謝謝 2011-09-20 08:11:47
wanhscn(金幣+1): 鼓勵(lì)分享！ 2011-09-20 11:45:19
dhd997(金幣+3): good 2011-09-19 18:04:59
donnafeng(金幣+5): 謝謝 2011-09-20 08:11:47
wanhscn(金幣+1): 鼓勵(lì)分享！ 2011-09-20 11:45:19
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1、我們實(shí)驗(yàn)室一般在OD為0.6左右加IPTG，這個(gè)時(shí)期是細(xì)菌的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。（但有一次我在OD=1.0時(shí)加表達(dá)出的蛋白沒看到影響） 2、溶氧量我們一般都不考慮，就在500ml的燒瓶中裝200ml的LB誘導(dǎo)。 3、一般采取25—30度誘導(dǎo)，IPTG在0.1—0.4mM左右，低溫誘導(dǎo)表達(dá)可溶性蛋白可能相對(duì)較多，而目的蛋白總量可能會(huì)減少，這要根據(jù)不同需要，需要摸索不同條件才能找到最大表達(dá)量。 |
4樓2011-09-19 16:09:44
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