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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 藥學 » 藥物分析 » HPLC中流動相的pH問題？
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yilishanshan木蟲 (正式寫手)
大星星
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[求助]
HPLC中流動相的pH問題？
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弱弱地問，HPLC中，流動相若用磷酸調(diào)pH值至4，調(diào)過了，pH到3了，怎么辦？用NaOH滴加中和嗎？一般多少濃度的NaOH？ HPLC實驗中，流動相的pH影響大嗎？ 流動相中加入乙酸鈉，用冰醋酸調(diào)pH；而流動相中加入磷酸二氫鉀，用磷酸調(diào)pH，是要緩沖鹽和對應的酸一起嗎？若流動相中加入磷酸鹽，是不是只能用磷酸調(diào)pH，不能用鹽酸、冰醋酸？ 懇請高手賜教，感激不盡！  |
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【答案】應助回帖
★
karl2100(金幣+1): 謝謝！ 2011-09-27 23:35:15
karl2100(金幣+1): 謝謝！ 2011-09-27 23:35:15
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流動相之所以選擇磷酸鹽（鉀鹽、鈉鹽）緩沖體系，是因為磷酸鹽緩沖液可以提供穩(wěn)定的pH環(huán)境，利于分離。再者鉀離子、鈉離子皆有飽和柱子的活性中心，避免分析物質(zhì)與活性中心結(jié)合，造成峰拖尾，變寬。其中鉀離子的作用強于鈉離子。 pH調(diào)過了，用一點的氫氧化鈉也可以，因為只要在磷酸鹽的緩沖范圍內(nèi)，一點改變對于整個系統(tǒng)是沒什么影響的。這只是一般情況，特殊情況特殊考慮。 如果流動相里有磷酸最好還是別加醋酸，兩者的緩沖范圍不太一樣，（兩個緩沖系統(tǒng)），這個和上面的氫氧化鈉不同。 |
16樓2011-09-23 16:23:19
癡夷子皮
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【答案】應助回帖
★ ★
jiangchunyong(金幣+2): 謝謝應助!歡迎常來！ 2011-09-20 08:36:49
yilishanshan(金幣+5): 謝謝，若P 2011-09-27 19:33:15
jiangchunyong(金幣+2): 謝謝應助!歡迎常來！ 2011-09-20 08:36:49
yilishanshan(金幣+5): 謝謝，若P 2011-09-27 19:33:15
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pH影響的大小，主要取決于樣品酸堿性。樣品中性，基本沒啥影響，樣品酸堿性，對保留時間影響較大，流動相pH在樣品pKa正負1范圍內(nèi)變化，保留時間變化最大。 酸鹽以對應的酸調(diào)pH，能形成較穩(wěn)定的pH緩沖體系，若流動相有蒸發(fā)沉淀等變化，不至于流動相pH變化太大而造成保留時間發(fā)生變化。當然，以磷酸鹽為例，若以鹽酸、醋酸等調(diào)pH，亦未嘗不可。 返調(diào)pH 的問題。理論上，是可以的。引入少量的鹽，一般不會對峰型等造成加大的影響。濃度，隨意。 |
2樓2011-09-20 08:26:26
xiaoxiazizx
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3樓2011-09-20 09:51:29
4樓2011-09-20 11:22:00
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