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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 藥學 » 藥物分析 » HPLC中流動相的pH問題？
| 查看: 4440 | 回復: 41 | ||||||
yilishanshan木蟲 (正式寫手)
大星星
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[求助]
HPLC中流動相的pH問題？
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弱弱地問，HPLC中，流動相若用磷酸調pH值至4，調過了，pH到3了，怎么辦？用NaOH滴加中和嗎？一般多少濃度的NaOH？ HPLC實驗中，流動相的pH影響大嗎？ 流動相中加入乙酸鈉，用冰醋酸調pH；而流動相中加入磷酸二氫鉀，用磷酸調pH，是要緩沖鹽和對應的酸一起嗎？若流動相中加入磷酸鹽，是不是只能用磷酸調pH，不能用鹽酸、冰醋酸？ 懇請高手賜教，感激不盡！  |
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【答案】應助回帖
★ ★
jiangchunyong(金幣+2): 謝謝應助!歡迎常來！ 2011-09-20 08:36:49
yilishanshan(金幣+5): 謝謝，若P 2011-09-27 19:33:15
jiangchunyong(金幣+2): 謝謝應助!歡迎常來！ 2011-09-20 08:36:49
yilishanshan(金幣+5): 謝謝，若P 2011-09-27 19:33:15
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pH影響的大小，主要取決于樣品酸堿性。樣品中性，基本沒啥影響，樣品酸堿性，對保留時間影響較大，流動相pH在樣品pKa正負1范圍內變化，保留時間變化最大。 酸鹽以對應的酸調pH，能形成較穩(wěn)定的pH緩沖體系，若流動相有蒸發(fā)沉淀等變化，不至于流動相pH變化太大而造成保留時間發(fā)生變化。當然，以磷酸鹽為例，若以鹽酸、醋酸等調pH，亦未嘗不可。 返調pH 的問題。理論上，是可以的。引入少量的鹽，一般不會對峰型等造成加大的影響。濃度，隨意。 |
2樓2011-09-20 08:26:26
xiaoxiazizx
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3樓2011-09-20 09:51:29
4樓2011-09-20 11:22:00
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【答案】應助回帖
★
karl2100(金幣+1): 謝謝應助！ 2011-09-21 23:02:04
karl2100(金幣+1): 謝謝應助！ 2011-09-21 23:02:04
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分情況 1、如果是已有方法（包括已有標準及已有明確文獻），則應嚴格按標準方法操作，隨意改動是不可取的。尤其不能加入原系統(tǒng)注明成分之外的其他成分。其中如果是文獻的方法，建議完整重現(xiàn)后再嘗試優(yōu)化。 2、如果是新建方法則相對靈活，諸如另加加掃尾劑這些措施都是可以選擇的。一般來說緩沖對還是比較考究的，如磷酸及磷酸鹽，醋酸及醋酸鹽，鹽酸及氯化鉀（美國藥典），等等，這些緩沖對出來的結果往往以pH為系統(tǒng)評價最關鍵，但絕對不是只看pH。 3、緩沖對的成分，很多情況下是可以替換的。但是絕對不是沒有影響，我曾經(jīng)做過一些嘗試，比如以鈉鹽替換鉀鹽制備緩沖系統(tǒng)，結果很多不可重現(xiàn)。當然，也有可能是我有些操作細節(jié)沒有注意到，但是，與其這樣引進一些不穩(wěn)定因素，去查原因，還是循規(guī)蹈矩來的好。 |
9樓2011-09-21 10:19:16
10樓2011-09-21 11:37:02
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