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1987talent新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求助啊，bac-to-bac表達(dá)純化問(wèn)題~~ 已有2人參與
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最近用昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)純化一個(gè)蛋白，用的細(xì)胞是sf9，P1P2P3都檢測(cè)到了蛋白高表達(dá)，考染W(wǎng)B都檢測(cè)到表達(dá)量很高，但是在純化的時(shí)候第一步裂解，上清里就是檢測(cè)不到蛋白，幾乎全部都在沉淀里，換了商品用的裂解液還是無(wú)濟(jì)于事，我用的lysis buffer是最常規(guī)的那種，Nacl300mM；咪唑10mM；NaH2PO4 50mM；PH 8.0；加了NP-40還是一樣都在沉淀里，我的蛋白等電點(diǎn)6.06，所以肯定不是PH的問(wèn)題，超聲破碎的時(shí)候功率也不高，時(shí)間也不算長(zhǎng)。我估計(jì)得從改buffer的配方上入手，哪位高手有經(jīng)驗(yàn)啊，請(qǐng)求指點(diǎn)一二~~ [ 來(lái)自科研家族 Natural Products家族 ] |
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2樓2014-12-22 09:40:03
3樓2014-12-22 21:13:27
yanzhuo
無(wú)蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: -21.1
- 帖子: 93
- 在線: 25.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 395096
- 注冊(cè): 2007-06-07
- 性別: MM
- 專業(yè): 膜生物化學(xué)與膜生物物理學(xué)
4樓2014-12-25 17:56:40
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5樓2014-12-26 11:37:00
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