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1987talent新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助啊，bac-to-bac表達(dá)純化問題~~ 已有2人參與
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最近用昆蟲表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)純化一個蛋白，用的細(xì)胞是sf9，P1P2P3都檢測到了蛋白高表達(dá)，考染W(wǎng)B都檢測到表達(dá)量很高，但是在純化的時候第一步裂解，上清里就是檢測不到蛋白，幾乎全部都在沉淀里，換了商品用的裂解液還是無濟(jì)于事，我用的lysis buffer是最常規(guī)的那種，Nacl300mM；咪唑10mM；NaH2PO4 50mM；PH 8.0；加了NP-40還是一樣都在沉淀里，我的蛋白等電點(diǎn)6.06，所以肯定不是PH的問題，超聲破碎的時候功率也不高，時間也不算長。我估計得從改buffer的配方上入手，哪位高手有經(jīng)驗(yàn)啊，請求指點(diǎn)一二~~ [ 來自科研家族 Natural Products家族 ] |
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3樓2014-12-22 21:13:27
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