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First, 293 cells stably expressing Moloney gag and pol under control of cytomegalovirus (CMV) promoter-enhancer were transiently transfected by CaPO4 precipitation with 20 ug of pLXSN retroviral vector and 5 ug of the plasmid pMDG containing the vesicular stomatitis virus (VSVg) envelope downstream of the CMV promoter-enhancer. and a 100 ul sample was loaded into disposable chambers and centrifuged for 1 min onto glass slides in a cytocentrifuge。Staining was verified by visualization under a light microscope, and the slides were mounted with glass cover slips with the use of Permount mounting media 。The population of cells was categorized as either viable, apoptotic, or necrotic when analyzed by staining morphology. Counting was performed blind, meaning that each slide was given a number and the identity of each sample was not known during counting. The counting procedure made use of a light microscope at a magnification that allowed the incorporation of about 100 cells per field. Five fields were counted per slide, and each experimental condition was performed two times. |
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2樓2011-10-04 11:04:41
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首先，293細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)莫洛尼GAG和POL下控制巨細(xì)胞病毒（CMV）啟動(dòng)子增強(qiáng)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染CaPO4降水20微克的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PLXSN和5質(zhì)粒含有水泡性口炎病毒（VSVg）PMDG UG信封下游CMV啟動(dòng)子增強(qiáng)。 銷售100微升樣品裝入一次性商會(huì)cytocentrifuge在1分鐘到玻片離心染色光鏡下可視化驗(yàn)證，并安裝與使用Permount安裝媒體的玻璃蓋玻片的幻燈片。。細(xì)胞的人口被歸類為 無論是可行的，細(xì)胞凋亡或壞死時(shí)，染色形態(tài)分析。點(diǎn)票是盲目的，意味著每張幻燈片被賦予了每個(gè)樣本的數(shù)量和身份，沒有在計(jì)數(shù)。點(diǎn)票程序在使用光學(xué)顯微鏡的放大，使約100個(gè)細(xì)胞每場(chǎng)納入。五個(gè)領(lǐng)域分別計(jì)數(shù)每張幻燈片，每個(gè)實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行兩次。 |
3樓2011-10-06 18:41:10
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5樓2011-10-08 08:39:59
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6樓2011-10-11 14:22:43
fjtony163
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sltmac: 歡迎常來~ 2011-10-14 08:52:21
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首先，在巨細(xì)胞病毒（CMV）啟動(dòng)子的增強(qiáng)子控制下，293個(gè)穩(wěn)定表達(dá)莫羅尼氏病毒“GAG和POL”（這個(gè)我不知道是啥）的細(xì)胞，被磷酸鈣沉淀、20微克的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PLXSN、5微克含有水泡性口炎病毒（VSVg） pMDG質(zhì)粒快速轉(zhuǎn)染。 將100微升樣品裝入一次性容器內(nèi)。在細(xì)胞離心機(jī)內(nèi)離心1分鐘后放到玻片上。在光學(xué)顯微鏡下直接驗(yàn)證染色，然后使用Permount安裝媒介將玻片和蓋玻片結(jié)合。根據(jù)染色后的形態(tài)，細(xì)胞的群體被分類為能生存的，凋亡的，或者壞死的。直接計(jì)數(shù)將是隨機(jī)，意味著對(duì)于每塊玻片，數(shù)值和類別在計(jì)數(shù)過程中不知道的。計(jì)數(shù)過程將在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行，視野中約有100個(gè)細(xì)胞。每塊玻片取五個(gè)可視區(qū)域，每種實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行兩次計(jì)數(shù)。 有一些術(shù)語查不到，應(yīng)該差不多了 |
7樓2011-10-11 14:56:09
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