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joyjane88銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
各位蟲友，誰做過原核基因組補洞工作，本人遇到一些問題想請教一下。
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| 各位蟲友，本人正在完善實驗室一株細菌的基因組全圖，也就是gap closure這項工作。前期的一些gaps很容易就搞定了，pcr+sequencing.現(xiàn)在到接近尾聲的地步了，剩下幾個gaps,兩個sequece gaps,三四個physical gaps，嘗試了多種方法都得不到PCR產物。用過的PCR方法有常規(guī)-，長距離-，多重-PCR，使用過高GC buffer，調整過引物、模板濃度和酶的用量，重新設計了引物，Takara的genome walking kit也嘗試過了。是不是還有哪些方面可以改進，或者還有什么方法可以嘗試？？？現(xiàn)在有點不知所措，望各位好心的蟲友們多多給些意見和建議。 |
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3樓2011-10-05 15:56:51
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