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lilylove170新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
sal 及 sph 兩個(gè)酶切位點(diǎn)用過(guò)的請(qǐng)指教
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5- GTAAGCATGCGGAGGAAAGTAGTTATGACTGAT -3（SphⅠ） 5- TGCGGTCGACACTTTAGACAGTATACACG -3（SalⅠ） rt 上面的引物中保護(hù)堿基及酶切位點(diǎn)沒(méi)有錯(cuò)誤吧？說(shuō)什么都連不上，謝謝 好心人幫助 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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dhd997(金幣+2): good 2011-10-08 08:04:20
lilylove170(金幣+1): 2011-10-08 19:32:20
dhd997(金幣+2): good 2011-10-08 08:04:20
lilylove170(金幣+1): 2011-10-08 19:32:20
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序列設(shè)計(jì)的沒(méi)問(wèn)題 SalⅠ這個(gè)酶貌似效率不是很高，還有我記得這個(gè)好像酶和甘油的比例比較高，具體好像是因?yàn)楦视蜁?huì)導(dǎo)致酶切的專(zhuān)一性發(fā)生變化。所以你在酶切體系里面應(yīng)該盡量少給點(diǎn)酶，然后通過(guò)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間來(lái)彌補(bǔ)。另外你要是怕保護(hù)堿基不怎么給力可以考慮連T載然后雙酶切。 |
2樓2011-10-08 00:02:45
lilylove170
新蟲(chóng) (小有名氣)
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5樓2014-12-22 19:58:29
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