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蝸牛061610木蟲(chóng) (小有名氣)
1
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[求助]
將質(zhì)粒上緊挨著的兩個(gè)酶切位點(diǎn)進(jìn)行雙酶切后連接外源基因片段，是不是不好連接？
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有人說(shuō)如果質(zhì)粒上兩個(gè)切點(diǎn)緊挨著的話，雙酶切容易切錯(cuò)。我就先用一個(gè)酶進(jìn)行酶切，切完后過(guò)pcr純化試劑盒后用第二個(gè)酶進(jìn)行酶切，再過(guò)pcr純化試劑盒進(jìn)行酶連。酶連了兩批，挑去轉(zhuǎn)化子抽取質(zhì)粒進(jìn)行pcr鑒定都是假陽(yáng)性，搞不清楚是什么原因。 [ 來(lái)自科研家族 化學(xué)生物學(xué) ] |
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蝸牛061610
木蟲(chóng) (小有名氣)
1
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7樓2011-10-10 08:26:55
amilie030312
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助發(fā)帖！ 2011-10-09 20:19:42
蝸牛061610(金幣+2): 謝謝交流 2011-10-10 08:29:41
amisking(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助發(fā)帖！ 2011-10-09 20:19:42
蝸牛061610(金幣+2): 謝謝交流 2011-10-10 08:29:41
| 兩個(gè)酶切位點(diǎn)挨的近那是有多近�。抠|(zhì)粒要計(jì)算保護(hù)堿基的話要計(jì)算保護(hù)堿基對(duì)不是保護(hù)堿基個(gè)數(shù)，如果保護(hù)堿基不夠酶切就沒(méi)辦法切好，我有疑問(wèn)的是你為啥每次酶切完了都要回收一下，質(zhì)粒損失多大啊。另外，連接如果連接不上看是否是酶切的末端有平也有粘，這樣不太好連的，最好兩邊都是4堿基突出的粘端是最好連的。至于假陽(yáng)性，出現(xiàn)這個(gè)結(jié)果的可能性還真不是一句兩句說(shuō)得清的，一個(gè)問(wèn)題一個(gè)問(wèn)題排除吧。 |
2樓2011-10-09 14:30:25
yuxia82012
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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3樓2011-10-09 16:41:11
酷似您這是不好酶切的原因比達(dá)大 4樓2011-10-09 21:18:43
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