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蝸牛061610木蟲 (小有名氣)
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[求助]
將質(zhì)粒上緊挨著的兩個酶切位點進行雙酶切后連接外源基因片段，是不是不好連接？
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有人說如果質(zhì)粒上兩個切點緊挨著的話，雙酶切容易切錯。我就先用一個酶進行酶切，切完后過pcr純化試劑盒后用第二個酶進行酶切，再過pcr純化試劑盒進行酶連。酶連了兩批，挑去轉(zhuǎn)化子抽取質(zhì)粒進行pcr鑒定都是假陽性，搞不清楚是什么原因。 [ 來自科研家族 化學(xué)生物學(xué) ] |
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lw19850128
銀蟲 (小有名氣)
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9樓2012-07-10 12:51:59
amilie030312
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+2): 鼓勵應(yīng)助發(fā)帖！ 2011-10-09 20:19:42
蝸牛061610(金幣+2): 謝謝交流 2011-10-10 08:29:41
amisking(金幣+2): 鼓勵應(yīng)助發(fā)帖！ 2011-10-09 20:19:42
蝸牛061610(金幣+2): 謝謝交流 2011-10-10 08:29:41
| 兩個酶切位點挨的近那是有多近啊？質(zhì)粒要計算保護堿基的話要計算保護堿基對不是保護堿基個數(shù)，如果保護堿基不夠酶切就沒辦法切好，我有疑問的是你為啥每次酶切完了都要回收一下，質(zhì)粒損失多大啊。另外，連接如果連接不上看是否是酶切的末端有平也有粘，這樣不太好連的，最好兩邊都是4堿基突出的粘端是最好連的。至于假陽性，出現(xiàn)這個結(jié)果的可能性還真不是一句兩句說得清的，一個問題一個問題排除吧。 |
2樓2011-10-09 14:30:25
yuxia82012
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3樓2011-10-09 16:41:11
酷似您這是不好酶切的原因比達大 4樓2011-10-09 21:18:43
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