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樹(shù)寶寶zyx新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
我的PCR電泳圖怎么這樣的啊。。。
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我用的是底泥提取出來(lái)的DNA，其260/280,260/230達(dá)到1.8,1.9的樣子，應(yīng)該還不錯(cuò)。我選用的引物是16SrDNA V3區(qū)的通用引物，27F和1495R。PCR條件是參考文獻(xiàn)的，采用降落式。為什么電泳圖會(huì)變成這樣呢。自右手邊起第一個(gè)是Marker，第二個(gè)是空白，而且我每次做的空白經(jīng)常會(huì)有條帶出現(xiàn)，做了好多次總是不能出現(xiàn)滿意的結(jié)果，很著急。請(qǐng)各位不吝賜教，先謝謝了。 PCR電泳圖 |
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amisking(金幣+2): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流！ 2011-10-13 19:46:12
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1,方向反了，一般習(xí)慣都是膠孔在上面 2，從你的marker來(lái)看，應(yīng)該是電泳除了問(wèn)題 建議更換新的電泳液，重新做膠（瓊脂糖濃度高一些，膠硬一些），還有就是降低電壓重新跑 |
樹(shù)寶寶zyx2樓2011-10-13 11:04:12
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3樓2011-10-13 11:06:12
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4樓2011-10-13 11:09:57
【答案】應(yīng)助回帖
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wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2011-10-13 12:28:28
樹(shù)寶寶zyx(金幣+2): 2011-10-13 16:20:39
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樹(shù)寶寶zyx(金幣+2): 2011-10-13 16:20:39
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1.空白也有條帶，應(yīng)該是交叉污染了。 2.你的PCR條帶不清晰，是不是pcr沒(méi)擴(kuò)好？重新做一次（確保加樣正確），還是不行的話就換PCR條件，可以自己摸索。一般是 95度 5min {95 30s 55-57 30s（看你自己的引物） 72 1min（看你的DNA大小，一般1kb/min）} 25-35個(gè)循環(huán) 72度 7min |
5樓2011-10-13 11:55:55
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【答案】應(yīng)助回帖
樹(shù)寶寶zyx(金幣+2): 2011-10-13 16:20:24
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1、連Marker一并出現(xiàn)抹帶一般都是電泳的問(wèn)題，一種可能是電泳液用久了，里邊有雜質(zhì)，建議更換；另一種可能是膠沒(méi)凝好，配膠時(shí)誤用水（應(yīng)用1x TAE）溶解瓊脂糖也會(huì)出現(xiàn)模糊和抹帶；電壓稍大沒(méi)很大關(guān)系的，偶爾趕時(shí)間130V我都跑過(guò)； 2、這圖反著看起來(lái)真不舒服，你說(shuō)幾次的空白都有條帶可能是哪個(gè)試劑污染了，或者體系配置有問(wèn)題。一步一步檢查吧。 |
6樓2011-10-13 12:40:20
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7樓2011-10-13 13:59:52
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