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培養(yǎng)大腸桿菌提取質粒失敗。。。
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我是個能有500個拷貝的質粒。。轉到大腸桿菌中，培養(yǎng)渾濁（12小時）后提取，發(fā)現(xiàn)老是提取不出來，質粒的濃度很低。我是加了卡那霉素。。�？鞘沁@個月內按比例配的, 終濃度按質粒說明書上是30微克/毫升的量。我做PCR卻能夠檢驗我的菌中是轉染了目的質粒的，就是提不出來，濃度低。 另外，我發(fā)現(xiàn)我培養(yǎng)的大腸桿菌，養(yǎng)時間久了，比如好幾天，會在LB液體培養(yǎng)基中會產生絮狀沉淀，這個正常嗎。。 最后一個問題，我發(fā)現(xiàn)，我轉化質粒的菌，有的菌要3天才能在LB固體涂有卡那抗生素的培養(yǎng)基上長出來，這個是真的嗎。 您有什么建議沒有，謝謝大家的幫助。。。感激不盡。。。 |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金幣+5, MicEPI+1): 高手，謝謝回復哦~~~ 2011-10-17 23:54:44
scelab(金幣+5, MicEPI+1): 高手，謝謝回復哦~~~ 2011-10-17 23:54:44
| 這個質粒是復制型質粒嗎？你提取質粒是通過試劑盒提的嗎，還是手提的呢，若是手提，會不會試劑問題，或是你的操作問題呢，破壁的時候有沒有完全啊等等。你培養(yǎng)的大腸桿菌時間久了，會不會產生菌膜了呢，所以產生絮狀沉淀啊，雖然沒見過普通的大腸桿菌能產生絮狀（沒有培養(yǎng)這么久過），但是某些革蘭氏陰性菌株經常會產生菌膜的，不知道你的大腸是不是這個原因。雖然不知道卡那穩(wěn)不穩(wěn)定，但是像氨芐平板放置3天估計已經沒用了，所以長出的菌株的可能都是假陽性，卡那抗性不是倒平板之前到的嗎，怎么會涂在表面呢。是不是真的，你可以挑些菌株做菌落PCR驗證下嘛？如果這個質粒有其他抗性，可以換著試試啊。 |
2樓2011-10-17 23:49:27
zc10052157
新蟲 (正式寫手)
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3樓2011-10-18 11:01:04
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