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王玉民新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助關(guān)于轉(zhuǎn)化的問題？
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| 請問大家，連接之后轉(zhuǎn)化時，熱擊的時間使30s好還是90s好？復(fù)蘇時搖床的轉(zhuǎn)速和時間多少最合適？ |
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2樓2011-10-20 10:23:20
3樓2011-10-20 10:24:39
王玉民
新蟲 (小有名氣)
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4樓2011-10-20 10:27:29
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5樓2011-10-20 10:29:38
6樓2011-10-20 10:33:02
peace12039088
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7樓2011-10-20 10:37:17
三目
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8樓2011-10-20 10:41:39
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9樓2011-10-20 10:43:01
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
西瓜(金幣+3): 剪切力的問題第一次聽說，有沒有來源呀，學(xué)習(xí)下.不過不涂板的話不容易得到單菌落吧。 2011-10-20 18:29:09
西瓜(金幣+3): 剪切力的問題第一次聽說，有沒有來源呀，學(xué)習(xí)下.不過不涂板的話不容易得到單菌落吧。 2011-10-20 18:29:09
| 轉(zhuǎn)化 冰上融化感受態(tài) 加入DNA后用槍混勻后置冰上 30min 其間勿動 42度熱激90s 冰上放置2min冷卻 加入1ml LB培養(yǎng)基37度恢復(fù)1h 涂布平板 恢復(fù)時轉(zhuǎn)速隨意調(diào)當(dāng)然切勿過高 不轉(zhuǎn)也行 板子張的不好不一定全是轉(zhuǎn)化的原因 可能因為涂布板子時出的問題 建議直接將恢復(fù)后的菌液倒在平板上超凈臺吹干后倒置培養(yǎng) 這樣就避免了涂布時的剪切力對菌照成的損傷 |
10樓2011-10-20 10:47:01
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