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donnafeng金蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白透析沉淀
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預測的重組蛋白等電點是6.75 分子量約17kd 蛋白過ni柱后透析 用的是ph7.5的50mMtris-hcl緩沖液過夜 結果出現(xiàn)絮狀的沉淀 1.可能是等電點沉淀嗎?看見有人說要偏離等電點2-3個單位 是這樣的嗎 改成ph8.5的tris-hcl緩沖液會不會好點呢 2.有可能是聚合沉淀嗎 文獻報道這種蛋白可能是二聚體或者四聚體 會不會在透析的過程中2、4、6、8聚體一類的都可能形成啊 如果是應該怎么處理 3.不用透析用柱層析來脫鹽行嗎 具體用什么柱子 什么條件來脫鹽 看見有人用g-25來做脫鹽柱 是不是不管多大的蛋白都可以用g-25脫鹽啊 脫鹽柱的原理是什么啊 |
【分子生物】EPI帖 |
鐵桿木蟲 (小有名氣)
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1.可能是等電點沉淀嗎?看見有人說要偏離等電點2-3個單位 是這樣的嗎 改成ph8.5的tris-hcl緩沖液會不會好點呢 蛋白質帶電荷的基團較多,pH酯有點影響,不會這么大吧!改變pH估計會有點效果,不會太大! 2.有可能是聚合沉淀嗎 文獻報道這種蛋白可能是二聚體或者四聚體 會不會在透析的過程中2、4、6、8聚體一類的都可能形成啊 如果是應該怎么處理 你看文獻有研究和你類似的蛋白質沒,有的話他們那些是否有聚合性質呢,。如果同類蛋白質多具有聚合性質,那估計你的蛋白質也具有這一性質。那可以考慮兩個方面,一是加入電解質(也就是無機鹽)減小聚合趨勢(因電荷作用引起的);另一個是疏水性作用引起的聚合,這個不太好辦了! 3.不用透析用柱層析來脫鹽行嗎 具體用什么柱子 什么條件來脫鹽 看見有人用g-25來做脫鹽柱 是不是不管多大的蛋白都可以用g-25脫鹽啊 脫鹽柱的原理是什么啊 脫鹽柱也可以,我用過G-25,原理就是無機小分子可以進入樹脂的小孔內(nèi),在柱子經(jīng)過的路徑長,二蛋白質大分子則不能進入樹脂內(nèi)部,經(jīng)由樹脂間隙流出,由于兩類物質所經(jīng)歷的途徑長短不同,實現(xiàn)分離! 你觀察到底聚合估計是由于溶液中的鹽分減少,蛋白質間帶不同電荷的基團相互吸引引起蛋白質分子沉降。 |
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