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donnafeng金蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白透析沉淀
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預(yù)測的重組蛋白等電點是6.75 分子量約17kd 蛋白過ni柱后透析 用的是ph7.5的50mMtris-hcl緩沖液過夜 結(jié)果出現(xiàn)絮狀的沉淀 1.可能是等電點沉淀嗎？看見有人說要偏離等電點2-3個單位 是這樣的嗎 改成ph8.5的tris-hcl緩沖液會不會好點呢 2.有可能是聚合沉淀嗎 文獻(xiàn)報道這種蛋白可能是二聚體或者四聚體 會不會在透析的過程中2、4、6、8聚體一類的都可能形成啊 如果是應(yīng)該怎么處理 3.不用透析用柱層析來脫鹽行嗎 具體用什么柱子 什么條件來脫鹽 看見有人用g-25來做脫鹽柱 是不是不管多大的蛋白都可以用g-25脫鹽啊 脫鹽柱的原理是什么啊 |
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4樓2011-10-28 14:03:09
wolaiyefeng
鐵桿木蟲 (小有名氣)
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2樓2011-10-27 11:52:58
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金幣+5, MolEPI+1): 鼓勵應(yīng)助！ 2011-10-27 20:48:31
donnafeng(金幣+40): 謝謝 實驗室只有superdex75了 可以用來脫鹽嗎 蛋白17kd左右 疏水聚合可以加表面活性劑一類的減少嗎 2011-10-28 10:11:57
donnafeng(金幣+10): 2011-10-28 22:24:13
amisking(金幣+5, MolEPI+1): 鼓勵應(yīng)助！ 2011-10-27 20:48:31
donnafeng(金幣+40): 謝謝 實驗室只有superdex75了 可以用來脫鹽嗎 蛋白17kd左右 疏水聚合可以加表面活性劑一類的減少嗎 2011-10-28 10:11:57
donnafeng(金幣+10): 2011-10-28 22:24:13
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1.可能是等電點沉淀嗎？看見有人說要偏離等電點2-3個單位 是這樣的嗎 改成ph8.5的tris-hcl緩沖液會不會好點呢 蛋白質(zhì)帶電荷的基團(tuán)較多，pH酯有點影響，不會這么大吧！改變pH估計會有點效果，不會太大！ 2.有可能是聚合沉淀嗎 文獻(xiàn)報道這種蛋白可能是二聚體或者四聚體 會不會在透析的過程中2、4、6、8聚體一類的都可能形成啊 如果是應(yīng)該怎么處理 你看文獻(xiàn)有研究和你類似的蛋白質(zhì)沒，有的話他們那些是否有聚合性質(zhì)呢，。如果同類蛋白質(zhì)多具有聚合性質(zhì)，那估計你的蛋白質(zhì)也具有這一性質(zhì)。那可以考慮兩個方面，一是加入電解質(zhì)（也就是無機鹽）減小聚合趨勢（因電荷作用引起的）；另一個是疏水性作用引起的聚合，這個不太好辦了！ 3.不用透析用柱層析來脫鹽行嗎 具體用什么柱子 什么條件來脫鹽 看見有人用g-25來做脫鹽柱 是不是不管多大的蛋白都可以用g-25脫鹽啊 脫鹽柱的原理是什么啊 脫鹽柱也可以，我用過G-25，原理就是無機小分子可以進(jìn)入樹脂的小孔內(nèi)，在柱子經(jīng)過的路徑長，二蛋白質(zhì)大分子則不能進(jìn)入樹脂內(nèi)部，經(jīng)由樹脂間隙流出，由于兩類物質(zhì)所經(jīng)歷的途徑長短不同，實現(xiàn)分離！ 你觀察到底聚合估計是由于溶液中的鹽分減少，蛋白質(zhì)間帶不同電荷的基團(tuán)相互吸引引起蛋白質(zhì)分子沉降。 |
3樓2011-10-27 14:23:08
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