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xiaoniu_e木蟲(chóng) (正式寫手)
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[求助]
請(qǐng)教液體培養(yǎng)基試管連續(xù)稀釋法的操作
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測(cè)試藥物的抗菌活性，用液體培養(yǎng)基試管連續(xù)稀釋法測(cè)MIC。 每個(gè)試管中，接種菌液量多少合適？ 我在網(wǎng)上搜，涉及到具體操作的不多，有一個(gè)有操作的寫的是“細(xì)菌檢測(cè)培養(yǎng)基通常采用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)，將約為104-105個(gè)/mL濃度的接種菌液分裝13個(gè)試管中”。 104-105個(gè)/mL是什么意思？（我是做藥物合成的，對(duì)抗菌測(cè)試是外行，不太懂，菌液濃度的表示方法是這樣的嗎？） 不同的菌株，都用這個(gè)濃度嗎？還是有區(qū)別？我打算做金葡和大腸桿菌。 這種方法有沒(méi)有什么標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程之類的呢？我在網(wǎng)上和文獻(xiàn)里沒(méi)檢索到，對(duì)這個(gè)領(lǐng)域不熟悉，可能檢索不到位吧。 希望專業(yè)人士賜教。 附一個(gè)我搜到的實(shí)驗(yàn)操作方法： 具體操作是：細(xì)菌檢測(cè)培養(yǎng)基通常采用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)，將約為104-105個(gè)/mL濃度的接種菌液分裝13個(gè)試管中，第一只試管中加入一定量的抗菌劑，并做2倍連續(xù)稀釋至第12只試管，第13只試管作為生長(zhǎng)對(duì)照，放置在37。C培養(yǎng)16-24hr，觀察結(jié)果，無(wú)菌增殖的最高稀釋管的、抗菌濃度，為最低抑菌濃度(MIC)。 試驗(yàn)觀察一般要在12-18 時(shí)進(jìn)行，如時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，輕度抑制的細(xì)菌可能會(huì)開(kāi)始繁殖，另一 方面一些抗菌劑因時(shí)間過(guò)長(zhǎng)作用減弱，受抑制的細(xì)菌會(huì)再次繁殖。 [ Last edited by xiaoniu_e on 2011-11-1 at 22:49 ] |
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zhang8826857(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2011-11-04 08:39:33
zhang8826857(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2011-11-04 08:39:33
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樓主的意思是不是，13支加菌的試管中，第一支加一定濃度比如 a的藥品溶液，2 — 12，分別加濃度2倍梯度稀釋藥品溶液，最后一只13號(hào)不加藥品做空白對(duì)照，通過(guò)計(jì)算13號(hào)的生長(zhǎng)情況，對(duì)比前面幾支來(lái)決定藥品的最低有效抗菌濃度。 如是是上面說(shuō)的情況的話，其實(shí)細(xì)菌稀釋到100cfu/ml純粹是方便計(jì)數(shù)，菌濃度太低或太高都影響你實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，所以需要你事先吧菌稀釋到這個(gè)100個(gè)/mL這個(gè)濃度...... |
5樓2011-11-04 00:18:40
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhang8826857(金幣+4): good，看lz反饋，反饋的好可以向版主申請(qǐng)個(gè)epi哦^_^ 2011-11-02 15:22:28
xiaoniu_e(金幣+10): 很詳細(xì)！謝謝！ 再請(qǐng)教一下，含藥的母液，是用什么配制呢？也是液體培養(yǎng)基？ 2011-11-02 19:24:55
zhang8826857(金幣+4): good，看lz反饋，反饋的好可以向版主申請(qǐng)個(gè)epi哦^_^ 2011-11-02 15:22:28
xiaoniu_e(金幣+10): 很詳細(xì)！謝謝！ 再請(qǐng)教一下，含藥的母液，是用什么配制呢？也是液體培養(yǎng)基？ 2011-11-02 19:24:55
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第一，你需要確定你的細(xì)菌溶液中含有的細(xì)菌數(shù)量，可以通過(guò)測(cè)OD值，平板計(jì)數(shù)法等來(lái)測(cè)定。 第二，每個(gè)試管中加入1~2m（如果這里加入是1ml，后面也都加入1ml）l液體培養(yǎng)基，編好序號(hào)為1-13. 第三，在編號(hào)1的試管中加入藥液，這就根據(jù)你配制的母液和需要的濃度來(lái)加入，一般盡量是加入1~2ml的配置母液哈，然后1號(hào)管中吸取1~2ml的混合液體加入第2號(hào)試管中，依次逐個(gè)稀釋至第11號(hào)管，12號(hào)管為陽(yáng)性對(duì)照（不加藥液，只加稀釋好的菌液），13號(hào)管為陰性對(duì)照（只有培養(yǎng)基，其余什么都不加入）（加入你要做的濃度是256 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25，那么這步加入藥液后，液體中的藥物濃度應(yīng)該是512 256 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5，是因?yàn)楹竺孢�有菌液將藥液進(jìn)行了2倍稀釋）。 第四，加入1ml稀釋好的菌液，放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12-16h觀察結(jié)果。 |
4樓2011-11-02 12:22:00
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